Translator Disclaimer
22 October 2012 Detection of Anti-Reticuloendotheliosis Virus Antibody by Blocking Enzyme-Linked Immunosorbent Assay with Expression Envelope Protein
Author Affiliations +
Abstract

The current reticuloendotheliosis virus (REV) antibody detection kit that uses enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) needs concentrated virus, which is difficult to obtain due to its poor propagation in cells. In addition, this kit detects only chicken antibody but not other species. To overcome these disadvantages, we cloned and expressed REV env gene to develop monoclonal antibodies (mAbs), which we used for antibody detection in ELISA. Three mAbs were prepared from mice. These three mAbs could recognize REVs from ducks and geese by immunodot assay. In addition, the epitopes that the three mAbs recognized were determined by using three different env protein fragments by western blotting. One mAb was used to develop a blocking ELISA (bELISA) coated with expressed env protein to detect anti-REV antibody in chicken serum. This assay had a 98.8% (79/80) agreement with a commercial ELISA kit. Another 146 chicken sera with known neutralization antibodies were used as positive controls to evaluate this bELISA. The sensitivity and specificity this bELISA were 88.9% (40/45) and 94.8% (91/96), respectively. Thus, this bELISA could be used for anti-REV antibody detection in birds.

Detección de anticuerpos contra el virus de la reticuloendoteliosis mediante el ensayo de inmunoabsorción con enzimas ligadas en formato de bloqueo con la expresión de la proteína de de la envoltura.

El estuche actual para la detección de anticuerpos contra la reticuloendoteliosis (REV) que utiliza un ensayo de inmunoabsorción con enzimas ligadas (ELISA) necesita virus concentrado, que es difícil de obtener debido a su baja propagación en células. Además, este estuche detecta sólo los anticuerpos de pollo, y no de otras especies. Para superar estas desventajas, se clonó y se expresó el gene env del virus de la reticuloendoteliosis para desarrollar anticuerpos monoclonales, que se utilizaron para la detección de anticuerpos por ELISA. Se prepararon tres anticuerpos monoclonales a partir de ratones. Estos tres anticuerpos pudieron reconocer virus de reticuloendoteliosis de patos y gansos por un ensayo inmunodot . Además, se determinaron los epítopos que los tres anticuerpos monoclonares reconocieron mediante el uso de tres diferentes fragmentos de la proteína env por inmunotransferencia Western. Un anticuerpo monoclonal fue usado para desarrollar un ELISA de bloqueo (bELISA) recubierto con una proteína env expresada y se utilizó para detectar anticuerpos anticuerpos contra el virus de la reticuloendoteliosis en el suero de pollos. Este ensayo mostró una concordancia del 98.8% (79/80) con un estuche comercial de ELISA. Otros 146 sueros de pollos reconocidos por contener anticuerpos neutralizantes fueron utilizados como controles positivos para evaluar este método de ELISA de bloqueo. La sensibilidad y la especificidad del método de ELISA de bloqueo fueron del 88.9% (40/45) y del 94.8% (91/96), respectivamente. Por lo tanto, este método de ELISA de bloqueo podría ser utilizado para la detección de anticuerpos contra el virus de la reticuloendoteliosis en aves.

American Association of Avian Pathologists
Nai-Huei Wu, Wen-Tzu Tsai, Hui-Wen Chen, Lih-Chiann Wang, and Ching-Ho Wang "Detection of Anti-Reticuloendotheliosis Virus Antibody by Blocking Enzyme-Linked Immunosorbent Assay with Expression Envelope Protein," Avian Diseases 57(1), 71-75, (22 October 2012). https://doi.org/10.1637/10290-062512-Reg.1
Received: 26 June 2012; Accepted: 1 October 2012; Published: 22 October 2012
JOURNAL ARTICLE
5 PAGES


SHARE
ARTICLE IMPACT
RIGHTS & PERMISSIONS
Get copyright permission
Back to Top