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1 June 2012 Development and Preliminary Application of a Quantitative PCR Assay for Detecting gtxA-Containing Gallibacterium Species in Chickens
Heping Huangfu, Jun Zhao, Xia Yang, Lu Chen, Hongtao Chang, Xinwei Wang, Qiaojing Li, Huixia Yao, Chuanqing Wang
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Abstract

A quantitative PCR (qPCR) assay using SYBR Green I was developed based on the published sequence of the gtxA gene from Gallibacterium anatis. This method produced reliable specificity, sensitivity, and repeatability. The detection rate of Gallibacterium in 181 clinical samples was 36.5% (66/181) by qPCR, which was superior to the detection rate of Gallibacterium-specific PCR (0/181) and an isolation and identification assay (18.2% or 33/181). No association was found between the prevalence of Gallibacterium and the age of the chickens. Gallibacterium infection was detected in one 4-day-old chicken, showing that infection can occur much earlier than the previously stated fourth week of life. Tissue sample analysis showed that Gallibacterium is mainly located in the trachea and ovaries, based on results from three groups of chicken with different health statuses. Furthermore, a titer analysis suggested that Gallibacterium loads in different organs may correlate with different clinical manifestations of disease. Thus, the qPCR assay developed in the present study is useful for identification and quantitative analysis of gtxA-containing Gallibacterium in various tissue samples from birds and for the assessment of the pathogenic mechanisms of Gallibacterium.

Desarrollo y aplicación preliminar de un ensayo cuantitativo de PCR para la detección en pollos de especies de Gallibacterium que contienen el gene gtxA en pollos.

Un ensayo de PCR cuantitativo (qPCR) utilizando SYBR Green I fue desarrollado con base en la secuencia publicada del gene gtxA de Gallibacterium anatis. Este método mostró una especificidad, sensibilidad y repetibilidad confiables. La tasa de detección de Gallibacterium en 181 muestras clínicas fue del 36.5% (66/181) mediante el ensayo qPCR, que fue superior a la tasa de detección mediante el método de PCR específico para Gallibacterium (0/181) y de un ensayo de aislamiento e identificación (18.2% o 33/181). No se encontró asociación entre la prevalencia de Gallibacterium y la edad de los pollos. La infección por Gallibacterium se detectó en un pollo de 4 días de edad, lo que mostró que la infección puede ocurrir mucho antes de la cuarta semana edad que era el tiempo de detección que se había establecido previamente. El análisis de muestras de tejidos mostró que el Gallibacterium se localiza principalmente en la tráquea y los ovarios, con base en los resultados de los tres grupos de pollos con diferentes condiciones de salud. Por otra parte, un análisis de títulos sugiere que las cargas de Gallibacterium en diferentes órganos pueden correlacionar con diferentes manifestaciones clínicas de la enfermedad. De esta manera, el ensayo qPCR desarrollado en el presente estudio es útil para la identificación y el análisis cuantitativo de cepas de Gallibacterium que contienen el gene gtxA en muestras de tejido diferentes de aves y también puede ser útil para la evaluación de los mecanismos patogénicos de Gallibacterium.

American Association of Avian Pathologists
Heping Huangfu, Jun Zhao, Xia Yang, Lu Chen, Hongtao Chang, Xinwei Wang, Qiaojing Li, Huixia Yao, and Chuanqing Wang "Development and Preliminary Application of a Quantitative PCR Assay for Detecting gtxA-Containing Gallibacterium Species in Chickens," Avian Diseases 56(2), 315-320, (1 June 2012). https://doi.org/10.1637/9907-082511-Reg.1
Received: 27 August 2011; Accepted: 1 December 2011; Published: 1 June 2012
JOURNAL ARTICLE
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