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15 January 2013 Cloning of a Very Virulent Plus, 686 Strain of Marek's Disease Virus as a Bacterial Artificial Chromosome
Sanjay M. Reddy, Aijun Sun, Owais A. Khan, Lucy F. Lee, Blanca Lupiani
Author Affiliations +
Abstract

Bacterial artificial chromosome (BAC) vectors were first developed to facilitate propagation and manipulation of large DNA fragments. This technology was later used to clone full-length genomes of large DNA viruses to study viral gene function. Marek's disease virus (MDV) is a highly oncogenic herpesvirus that causes rapid induction of T-cell lymphomas in chickens. Based on the virus's ability to cause disease in vaccinated chickens, MDV strains are classified into pathotypes, with the most virulent strains belonging to the very virulent plus (vv ) pathotype. Here we report the construction of BAC clones of 686 (686-BAC), a vv strain of MDV. Transfection of DNA isolated from two independent clones into duck embryo fibroblasts resulted in recovery of infectious virus. Pathogenesis studies showed that the BAC-derived 686 viruses were more virulent than Md5, a vv strain of MDV. With the use of a two-step red-mediated mutagenesis process, both copies of viral interleukin 8 (vIL-8) were deleted from the MDV genome, showing that 686-BACs were amenable to mutagenesis techniques. The generation of BAC clones from a vv strain of MDV is a significant step toward understanding molecular basis of MDV pathogenesis.

Nota de Investigación—Clonación de un virus muy virulento plus de la enfermedad de Marek, cepa 686 mediante un cromosoma bacteriano artificial.

Los vectores basados en cromosomas bacterianos artificiales (BAC) fueron desarrollados inicialmente para facilitar la propagación y manipulación de grandes fragmentos de ADN. Esta tecnología se utilizó posteriormente para clonar en su totalidad genomas de virus con ADN muy largos; para estudiar la función de genes virales. El virus de la enfermedad de Marek (MDV) es un herpesvirus altamente oncogénico que causa una rápida inducción de linfomas de células T en pollos. De acuerdo con la capacidad del virus para causar la enfermedad en los pollos vacunados, las cepas del virus de Marek se clasifican en patotipos, siendo las cepas más virulentas, las que están incluidas en el patotipo de cepas muy virulentas plus (vv ). En este trabajo, se presenta la construcción de clones de la cepa 686, que es una cepa vv , en cromosomas bacterianos artificiales (686-BAC). La transfección de ADN aislado a partir de dos clones independientes en fibroblastos de embrión de pato dio como resultado la recuperación de virus infeccioso. Los estudios de patogénesis mostraron que los virus derivados del clon 686-BAC virus fueron más virulentos que la cepa Md5, que es un virus muy virulento (vv). Mediante un proceso de mutagénesis con dos pasos, las dos copias de interleucina viral 8 (vIL-8) se eliminaron del genoma del virus de Marek, lo que muestra que los virus derivados del 686-BAC eran adecuados para realizar técnicas de mutagénesis. La generación de clones con cromosomas bacterianos artificiales de una cepa del virus de Marek muy virulenta plus es un paso importante hacia la comprensión de las bases moleculares de la patogénesis del virus de Marek.

American Association of Avian Pathologists
Sanjay M. Reddy, Aijun Sun, Owais A. Khan, Lucy F. Lee, and Blanca Lupiani "Cloning of a Very Virulent Plus, 686 Strain of Marek's Disease Virus as a Bacterial Artificial Chromosome," Avian Diseases 57(2s1), 469-473, (15 January 2013). https://doi.org/10.1637/10444-110412-ResNote.1
Received: 6 November 2012; Accepted: 1 December 2012; Published: 15 January 2013
JOURNAL ARTICLE
5 PAGES


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