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1 September 2013 Development of Real-Time Polymerase Chain Reaction Assay for Detection of Ornithobacterium rhinotracheale in Poultry
E. M. Abdelwhab, D. Lüschow, H. M. Hafez
Author Affiliations +
Abstract

Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) is an emerging bacterium causing severe economic losses in poultry mostly due to respiratory and locomotory disturbances. Due to the fastidious nature of the organism, ORT is often overgrown by faster-growing commensal and pathogenic bacteria. In this study we developed a real-time polymerase chain reaction (qPCR) assay for rapid and sensitive detection of ORT in samples collected from chickens and turkeys. The qPCR assay developed was able to detect 17 reference strains of ORT (serotypes A to Q) tested in this study, and no false-positive results were obtained from other organisms associated with respiratory tract infections. The qPCR assay was 100 times more sensitive than the modified conventional PCR. Using tenfold serial dilutions of the recombinant plasmid DNA containing the target gene fragment, the detection limit of the qPCR was estimated to be ≥100 plasmid copies per reaction. Out of 42 examined poultry flocks, 26 cases were tested positive by both assays. The qPCR assay reduces turnaround time to about 2 hr, two times faster than the modified conventional PCR.

Nota de Investigación—Desarrollo de un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la detección de Ornithobacterium rhinotracheale en aves comerciales.

Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) es una bacteria de reciente aparición que causa graves pérdidas económicas en las aves comerciales, principalmente debido a los problemas respiratorios y locomotores. Debido a la naturaleza exigente del organismo, O. rhinotracheale es a menudo encubierto por bacterias comensales o patógenas de crecimiento más rápido. En este estudio se desarrolló un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qPCR), para la detección rápida y sensible de O. rhinotracheale en muestras recolectadas de pollos y pavos. El ensayo de qPCR desarrollado fue capaz de detectar 17 cepas de referencia de O. rhinotracheale (serotipos A al Q) analizados en este estudio, y no se observaron resultados falsos-positivos con otros organismos relacionados con infecciones de las vías respiratorias. El ensayo qPCR era 100 veces más sensible que el ensayo de PCR convencional modificado. Mediante el uso de diluciones con base diez seriadas del plásmido de ADN recombinante que contenía el fragmento blanco del gene, se estimó que el límite de detección del método qPCR era de ≥ 100 copias de plásmido por reacción. De las 42 parvadas examinadas, 26 casos resultaron positivos por ambos ensayos. El ensayo qPCR reduce el tiempo de respuesta en aproximadamente 2 horas, dos veces más rápido que el método de PCR convencional modificado.

American Association of Avian Pathologists
E. M. Abdelwhab, D. Lüschow, and H. M. Hafez "Development of Real-Time Polymerase Chain Reaction Assay for Detection of Ornithobacterium rhinotracheale in Poultry," Avian Diseases 57(3), 663-666, (1 September 2013). https://doi.org/10.1637/10517-022213-ResNoteR
Published: 1 September 2013
JOURNAL ARTICLE
4 PAGES


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