Molecular characterization studies of a diverse collection of avian influenza viruses (AIVs) have demonstrated that AIVs' greatest genetic variability lies in the HA, NA, and NS genes. The objective here was to quantify the association between geographical locations, periods of time, and host species and pairwise nucleotide variation in the HA, NA, and NS genes of 70 isolates of H5N1 highly pathogenic avian influenza virus (HPAIV) collected from October 2005 to December 2007 from birds in Romania. A mixed-binomial Bayesian regression model was used to quantify the probability of nucleotide variation between isolates and its association with space, time, and host species. As expected for the three target genes, a higher probability of nucleotide differences (odds ratios [ORs] > 1) was found between viruses sampled from places at greater geographical distances from each other, viruses sampled over greater periods of time, and viruses derived from different species. The modeling approach in the present study maybe useful in further understanding the molecular epidemiology of H5N1 HPAI virus in bird populations. The methodology presented here will be useful in predicting the most likely genetic distance for any of the three gene segments of viruses that have not yet been isolated or sequenced based on space, time, and host species during the course of an epidemic.

Modelo de la asociación entre espacio, tiempo y especies hospedadoras con variaciones de los genes HA, NA y NS de virus de la influenza aviar H5N1 altamente patógenos aislados de aves en Rumania entre los años 2005 al 2007.

Los estudios de caracterización molecular de una colección diversa de virus de la influenza aviar (AIV) han demostrado que la mayor variabilidad genética de estos virus se encuentra en los genes HA, NA, y NS. El objetivo fue cuantificar la asociación entre la localización geográfica, los períodos de tiempo, y las especies hospedadoras con la variación en los pares de nucleótidos dentro de los genes HA, NA y NS de 70 aislamientos de virus de la influenza aviar altamente patógenos H5N1 (HPAIV) recolectados entre octubre de 2005 a diciembre del 2007 de aves en Rumania. Se utilizó un modelo de regresión bayesiana mixto binomial para cuantificar la probabilidad de variación de nucleótidos entre los aislamientos y su relación con el espacio, el tiempo, y las especies hospedadoras. Como se esperaba, para los tres genes estudiados, una mayor probabilidad de diferencias de nucleótidos (odds ratio [OR] > 1) se encontró entre los virus recolectados de lugares con grandes distancias geográficas entre sí, los virus detectados a lo largo de grandes períodos de tiempo, y los virus derivados de diferentes especies. El enfoque de este modelo en el presente estudio puede resultar útil para comprender aún más la epidemiología molecular del virus de la influenza aviar H5N1 altamente patógeno en poblaciones de aves. La metodología presentada, puede ser útil para predecir durante el curso de una epidemia, la distancia genética más probable para cualquiera de los tres segmentos de genes de virus que aún no han sido aislados, o secuenciados con base en el espacio, en el tiempo y en las especies hospedadoras.

Control of avian coccidiosis is increasingly being achieved by the administration of low doses of Eimeria oocysts to newly hatched chicks. The purpose of this study was to test the efficacy of gel beads containing a mixture of Eimeria acervulina, Eimeria maxima, and Eimeria tenella oocysts as a vaccine to protect broilers raised in contact with litter. Newly hatched chicks were either sprayed with an aqueous suspension of Eimeria oocysts or were allowed to ingest feed containing Eimeria oocysts-incorporated gel beads. Control, 1-day-old chicks were given an equivalent number of Eimeria oocysts (10³ total) by oral gavage or received no vaccine (nonimmunized controls). All chicks were raised in floor-pen cages in direct contact with litter. At 4 wk of age, all chickens and a control nonimmunized group received a high-dose E. acervulina, E. maxima, and E. tenella challenge infection. Chickens immunized with Eimeria oocysts in gel beads or by spray vaccination displayed significantly (P < 0.05) greater weight gain (WG) compared to nonimmunized controls. Feed conversion ratio (FCR) also showed a significant (P < 0.05) improvement in both groups relative to nonimmunized controls. Moreover, WG and FCR in both groups was not significantly different (P > 0.05) from chickens immunized by oral gavage or from nonimmunized, noninfected controls. Oocyst excretion after Eimeria challenge by all immunized groups was about 10-fold less than in nonimmunized controls. These findings indicate that immunization efficacy of gel beads and spray vaccination is improved by raising immunized chicks in contact with litter.

Protección de los pollos contra la coccidiosis en corrales de piso mediante la administración de ooquistes de Eimeria utilizando perlas de gel o por vacunación en aerosol.

El control de la coccidiosis aviar se lleva a cabo cada vez más mediante la administración de dosis bajas de oocistos de Eimeria a pollitos recién nacidos. El propósito de este estudio fue evaluar la eficacia de las perlas de gel que contienen una mezcla de ooquistes de Eimeria acervulina, Eimeria maxima y Eimeria tenella como una vacuna para proteger pollos criados sobre cama. Pollitos recién nacidos fueron ya sea sometidos a aerosoles con una suspensión acuosa de ooquistes de Eimeria o se les permitió ingerir alimentos que contenían ooquistes de Eimeria incorporados en perlas de gel. A los pollos de un día de edad del grupo control, se les administró un número equivalente de ooquistes de Eimeria (10³ en total) por sonda oral o no recibieron ninguna vacuna (controles no inmunizados). Todos los pollos fueron criados en corrales en contacto directo con la cama. A las cuatro semanas de edad, todos los pollos y el grupo control no inmunizado fueron desafiados con una dosis alta de E. acervulina, E. maxima y E. tenella. Los pollos inmunizados con ooquistes de Eimeria en perlas de gel o mediante vacunación por aerosol mostraron una mayor ganancia de peso, de manera significativa (P <0.05), en comparación con los controles n

In order to generate Salmonella enterica serovar Enteritidis (Salmonella Enteritidis) fimbriae, SEF14, the sefA gene, which encodes the main subunit of the SEF14 fimbrial protein, was amplified from Salmonella Enteritidis by polymerase chain reaction (PCR) and subcloned into a prokaryotic expression vector pET-28a( ) to yield pET-28a( )-sefA. The recombinant SefA (rSefA) protein was highly expressed and purified by nickel-affinity chromatography. Liposome-associated rSefA was prepared for oral immunization to seek protective efficacy for intestinal infection with Salmonella Enteritidis. The titers of the IgG and IgA in the intestinal mucus were 1∶256 and 1∶512, respectively. Moreover, the titers of IgG and IgA in the sera were 1∶256 and 1∶128, respectively. Two weeks after the booster immunization, the chickens were challenged orally with 2 × 10⁶ colony-forming units (CFUs) of live Salmonella Enteritidis, and fecal samples were examined for bacterial excretion from the intestinal tract. Significantly less fecal excretion of bacteria was observed in immunized chickens for 4 wk after challenge. The numbers of bacteria in the intestinal contents (cecum and rectum) were also significantly reduced in immunized chickens, in contrast with the unimmunized controls. Oral immunization with liposome-associated rSefA therefore elicits both systemic and mucosal antibody responses and results in reduced bacterial colonization in the intestinal tract and reduced excretion of Salmonella Enteritidis in the feces.

Reducción del número de Salmonella Enteritidis después la infección mediante la inmunización con la proteína SefA recombinante asociada a liposomas.

Con el fin de generar fimbrias SEF14 de Salmonella enterica serovar Enteritidis (Salmonella Enteritidis), el gene sefA, que codifica la subunidad principal de la proteína fimbrial SEF14, se amplificó a partir de Salmonella Enteritidis por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y se subclonó en un vector de expresión procariota pET-28a ( ) para producir el clon pET-28a ( )-sefA. La proteína recombinante SefA (rSefA) fue altamente expresada y purificada por cromatografía de afinidad con níquel. La proteína SefA recombinante y asociada a liposomas fue preparada para la inmunización oral para determinar la eficacia protectora contra la infección intestinal por Salmonella Enteritidis. Los títulos de IgG e IgA en la mucosa intestinal fueron de 1∶256 y 1∶512, respectivamente. Por otra parte, los títulos de IgG e IgA en el suero fueron 1∶256 y 1∶128, respectivamente. Dos semanas después de la inmunización de refuerzo, los pollos fueron desafiados por vía oral con 2 × 10⁶ unidades formadoras de colonias (UFC) de Salmonella Enteritidis viva y las muestras fecales se examinaron para la excreción bacteriana del tracto intestinal. Se observó excreción de bacterias en las heces significativamente menor en los pollos vacunados durante cuatro semanas después de la exposición. El número de bacterias en el contenido intestinal (ciego y recto) también se redujeron significativamente en los pollos inmunizados, a diferencia de los controles no inmunizados. Por lo tanto, la inmunización oral con rSefA asociada con liposomas provoca tanto respuestas de anticuerpos sistémicos y en las mucosas, resulta en la reducción de la colonización bacteriana en el tracto intestinal y reduce la excreción de Salmonella Ente

With the objective of detecting Salmonella species in the poultry house environment, sampling broiler breeder houses in the two-thirds slatted area and the one-third scratch area with pine shavings bedding can be difficult. The slatted area is where the females, consisting of approximately 90% of the population, eat, drink, and spend the majority of their time. The scratch area is where the males eat and drink, as well as where mating and mortality occur. Besides the nest boxes, the female feeders and water lines make the slatted areas more difficult to sample. However, it is important to take samples from the area with the greatest likelihood of isolating Salmonella. Therefore, boot swab samples were collected from 21 commercial broiler breeder chicken houses representing three different companies in north Georgia to estimate the prevalence of Salmonella on the slat vs. the scratch area in each chicken house. Every house sampled had a central scratch area covered with litter and two elevated slat areas constructed of wood. Four boot swab samples were collected on each side slat area by walking the entire length of the house for each swab. Eight samples were collected in the same manner from the scratch area. Results of 335 total samples were acquired, 167 of which were obtained from the slat area and 168 of which came from the scratch area, yielding 242 total Salmonella isolations. Salmonella was found in 117 of the slat samples, representing 70.1%, compared to 125 of the scratch area samples, representing 74.4%. Both the univariate (P  =  0.311) and the multivariable (P  =  0.303) analysis showed that sampling location was not associated with Salmonella prevalence.

Estimación de la prevalencia de especies de Salmonella en el área de rejillas en comparación con el área de cama en casetas de reproductores pesados.

Con el objetivo de detectar especies de Salmonella en el ambiente de casetas avícolas, el muestreo de las casetas de reproductoras pesadas en la zona de rejillas que corresponde a dos tercios de la caseta y de cama con viruta de madera que corresponde a un tercio puede ser difícil. El área de rejilla es donde las hembras, que corresponden a aproximadamente el 90% de la población, comen, consumen agua y pasan la mayor parte del tiempo. El área de cama es donde los machos comen y beben, y donde se produce el apareamiento y la mortalidad. Además de los nidales, los comederos de las hembras y las líneas de agua hacen que las zonas de rejilla sean más difíciles de muestrear. Sin embargo, es importante recolectar muestras de las zonas que representan la mayor probabilidad de aislar Salmonella. Por lo tanto, se recolectaron muestras de cubiertas de calzado de 21 casetas de reproductoras de pollos de engorde comerciales que representaron a tres empresas diferentes en el norte de Georgia para estimar la prevalencia de Salmonella en el área de rejillas con respecto al área de cama en cada caseta. Cada caseta tenía un área muestreada de zona central cubierta con cama y dos áreas de rejillas elevadas construidas de madera. Se recolectaron cuatro muestras de cubiertas de calzado en el área de rejillas de cada lado, caminando por toda la longitud de la caseta para cada cubierta. Ocho muestras se recogieron de la misma manera desde el área de cama. Se obtuvieron resultados de 335 muestras en total, de las cuales 167 se obtuvieron de la zona de rejillas y 168 de las cuales procedían de la zona de cama, obteniéndose un total de 242 aislamientos de Salm

This pilot analysis was conducted with data from 52 conventional grow-out broiler flocks in a prospective field observational study in the southeastern United States during 2003–2006. Each flock was sampled for Salmonella 1 wk before the end of grow-out, upon arrival at the processing plant, and during processing (prior to and immediately after carcass chilling). The broiler litter was sampled on the day of bird harvest. The grow-out feeding programs, including the medications delivered in feed, were surveyed with questionnaires completed by the broiler managers and feedmill managers. Each detail of the feeding program was tested for statistical association with the frequency of Salmonella in the flock at each sampling point, after accounting for variation in Salmonella frequency between the farms, broiler complexes, and companies. Significant associations were found between Salmonella frequency in the broiler flock pre- and postharvest and the inclusion of feeds containing individual coccidiostats and other antimicrobial growth promoters, days on feed, and total consumption of feeds containing these products, as well as with practices such as a mash feed and a nonmedicated withdrawal feed. The analysis provided testable hypotheses for how broiler feed medications impact the frequency of Salmonella in the flocks.

Efectos de los medicamentos de pollo de engorde sobre Salmonella.

Este análisis piloto se llevó a cabo con datos de 52 parvadas convencionales de pollo de engorde en un estudio de campo observacional prospectivo en el sureste de los Estados Unidos durante los años 2003 al 2006. Se recolectaron muestras de cada parvada para Salmonella una semana antes del final del periodo engorde tanto a su llegada a la planta de procesamiento y durante el proceso (antes e inmediatamente después del enfriamiento de la canal). La cama de pollos de engorda fue muestreada en el día que las aves se llevaron a la planta de procesamiento. Los programas de engorda de alimentación, incluidos los medicamentos adicionados en el alimento, fueron encuestados mediante cuestionarios completados por los directores y gerentes de fábrica de alimentos para pollo de engorde. Cada detalle del programa de alimentación se puso a prueba para la asociación estadística con la frecuencia de Salmonella en la parvada, en cada punto de muestreo después de contabilizada la variación en la frecuencia de Salmonella entre las granjas de pollos de engorde, los complejos y las empresas. Se encontraron asociaciones significativas entre la frecuencia de Salmonella antes y después del envío de las aves a la planta de procesamiento y con la inclusión de alimentos que contenían coccidiostatos individuales y otros antibióticos promotores del crecimiento, número de días en que se administró el alimento y el consumo total de alimento que contenían estos productos, así como con las prácticas tales como la administración de alimento en harina y alimento de retiro no medicado. El análisis proporciona hipótesis comprobables del mecanismo por el cual los medicamentos en el alimento afectan la frecuencia de Salmonella en las parvadas.

A low pathogenic avian influenza virus (LPAI H9N2) was administered to 3-wk-old chickens by aerosol exposure, intranasal inoculation, and by oral inoculation. Tests for virus were by in ovo assay and by real-time reverse-transcriptase PCR. The aerosol dosage was determined by aerosolizing virus into a chamber when it was empty and when it contained chickens. Air was collected and the amount of virus inhaled was estimated to be about 18% of the total body uptake. In transmission studies, tests for virus were conducted on oropharyngeal or cloacal swabs. The 50% infectious dose (ID₅₀) for aerosolized virus was about 2 log ₁₀ and 5 log ₁₀ lower than by nasal or oral inoculation, respectively. The recovery rate was higher from swabs of the oropharyngeal region than from the cloacal region (P < 0.05). For horizontal transmission studies, uninfected chickens were held in isolators with seeders that had been inoculated intranasally with the H9N2 virus. Chickens exposed by indirect contact were separated by screens from the seeders. In another isolator those directly exposed were intermingled with the seeders. During the 10-day test period, none of the chickens developed symptoms of disease, but infection was detected as early as 4 and 7 days in the indirectly and directly exposed groups, respectively. These findings suggested that aerosol transmission of viruses similar to LPAI H9N2 could efficiently occur, at least over short distances.

Transmisión por aerosol del virus de la influenza aviar H9N2 con tropismo por el tracto respiratorio de los pollos.

Un virus de la influenza aviar de baja patogenicidad (influenza aviar de baja patogenicidad H9N2) se administró a pollos de tres semanas de edad mediante exposición a aerosoles, o por inoculación intranasal, o por inoculación oral. Se realizaron pruebas para detectar virus por ensayo in ovo y por transcriptasa reversa y PCR en tiempo real. La dosis de aerosol se determinó mediante aerosolización del virus dentro de una cámara cuando estaba vacía y cuando contenía pollos. Se recolectó aire y la cantidad de virus inhalado se estimó ser de alrededor del 18% del total inhalado por el cuerpo. En los estudios de transmisión, se llevaron a cabo pruebas para detectar el virus de hisopados orofaríngeos y cloacales. La dosis infecciosa 50% (ID₅₀) para el virus en aerosol fue menor en 2 log₁₀ y en 5 log₁₀ en comparación con la inoculación nasal u oral, respectivamente. La tasa de recuperación fue mayor a partir de hisopos de la región orofaríngea que de la región cloacal (P < 0.05). Para los estudios de transmisión horizontal, se mantuvieron pollos no infectados en unidades de aislamiento con pollos infectados y diseminadores que habían sido inoculados por vía intranasal con el virus H9N2. Los pollos expuestos por contacto indirecto fueron separados de los pollos diseminadores mediante mallas. En otro aislador, las aves expuestas directamente fueron alojadas junto con las aves diseminadoras. Durante el período de prueba de 10 días, ninguno de los pollos desarrolló síntomas de la enfermedad, pero la infección se detectó tan pronto como cuatro y siete días en los grupos expuestos de manera indirecta y directa, respectivamente. Estos hallazgos sugieren que la transmisión por aerosol de virus similares al virus de la influenza aviar de baja patogenicidad H9N2, pueden ocurrir eficientemente al menos en distancias cortas.

Turkey coronavirus (TCoV) infection causes enteritis in turkeys of varying ages with high mortality in young birds. In older birds, field evidence indicates the possible involvement of TCoV in egg-production drops in turkey hens. However, no experimental studies have been conducted to demonstrate TCoV pathogenesis in turkey hens and its effect on reproductive performance. In the present study, we assessed the possible effect of TCoV on the reproductive performance of experimentally infected turkey hens. In two separate trials, 29- to 30-wk-old turkey hens in peak egg production were either mock-infected or inoculated orally with TCoV (Indiana strain). Cloacal swabs and intestinal and reproductive tissues were collected and standard reverse-transcription PCR was conducted to detect TCoV RNA. In the cloacal swabs, TCoV was detected consistently at 3, 5, 7, and 12 days postinoculation (DPI) with higher rates of detection after 5 DPI (>90%). All intestinal samples were also positive for TCoV at 7 DPI, and microscopic lesions consisting of severe enteritis with villous atrophy were observed in the duodenum and jejunum of TCoV-infected hens. In one of the trials TCoV was detected from the oviduct of two birds at 7 DPI; however, no or mild microscopic lesions were present. In both experimental trials an average of 28%–29% drop in egg production was observed in TCoV-infected turkey hens between 4 and 7 DPI. In a separate trial we also confirmed that TCoV can efficiently transmit from infected to contact control hens. Our results show that TCoV infection can affect the reproductive performance in turkey hens, causing a transient drop in egg production. This drop in egg production most likely occurred as consequence of the severe enteritis produced by the TCoV. However, the potential replication of TCoV in the oviduct and its effect on pathogenesis should be considered and further investigated.

Efecto de la infección por coronavirus sobre el comportamiento reproductivo de las pavas.

La infección por el coronavirus de los pavos (TCoV) causa enteritis en pavos de diferentes edades, con una mortalidad alta en aves jóvenes. En aves de mayor edad, la evidencia de campo indica la posible participación de este coronavirus en caídas de la producción de huevos en pavas. Sin embargo, no se han desarrollado estudios experimentales para demostrar la patogénesis de este coronavirus en pavas y su efecto en el rendimiento reproductivo. En el presente estudio, se evaluó el posible efecto del coronavirus de los pavos en el comportamiento reproductivo de pavas infectadas experimentalmente. En dos ensayos por separado, pavas de 29 a 30 semanas de edad que se encontraban en el pico de producción de huevos, fueron inoculadas con un placebo o fueron infectadas oralmente con el coronavirus de los pavos (cepa Indiana). Se recolectaron hisopos cloacales, tejidos intestinales y reproductivos y se llevó a cabo un método estándar de transcripción reversa y PCR para detectar al ARN del coronavirus de los pavos. Se detectó a este coronavirus en hisopos cloacales consistentemente a los tres, cinco, siete, y doce días después de la inoculación con tasas mayores de detección después de los cinco días después de la inoculación (> 90%). De la misma forma, todas las muestras intestinales fueron positivas para la presencia del coronavirus de los pavos a los siete días después de la inoculación y se observaron lesiones microscópicas que consistían de enteritis severa con atrofia de las vellosidades en el duodeno y en el yeyuno de gallinas infectadas con este coronavirus. En uno de los ensayos, se detectó al coronavirus de los pavos en el oviducto de dos aves a los siete días después de la inoculación, sin embargo, no se detectaron lesiones microscópicas leves. En ambos ensayos experimentales se observó en promedio una caída en la producción de huevo del 28% al 29% en las pavas infectadas con el coronavirus

This investigation to examine influenza A virus activity in avian species at four Ohio zoos was initiated to better understand the ecology of avian-origin influenza A (AIV) virus in wild aquatic birds and the possibility of spill-over of such viruses into captive zoo birds, both native and foreign species. Virus isolation efforts resulted in the recovery of three low pathogenic (LP) AIV isolates (one H7N3 and two H3N6) from oral-pharyngeal or cloacal swabs collected from over 1000 zoo birds representing 94 species. In addition, 21 LPAIV isolates possessing H3N6, H4N6, or H7N3 subtype combinations were recovered from 627 (3.3%) environmental fecal samples collected from outdoor habitats accessible to zoo and wild birds. Analysis of oral-pharyngeal and cloacal swabs collected from free-ranging mallards (Anas platyrhynchos) live-trapped at one zoo in 2007 resulted in the recovery of 164 LPAIV isolates (48% of samples) representing five HA and six NA subtypes and at least nine HA-NA combinations. The high frequency of isolate recovery is undoubtedly due to the capture and holding of wild ducks in a common pen before relocation. Serologic analyses using an agar gel immune diffusion assay detected antibodies to the influenza A virus type-specific antigen in 147 of 1237 (11.9%) zoo bird sera and in 14 of 154 (9%) wild mallard sera. Additional analyses of a limited number of zoo bird sera demonstrated HA- and NA-inhibition activity to 15 HA and nine NA subtypes. The spectrum of HA antibodies indicate antibody diversity of AIV infecting zoo birds; however, the contribution of heterologous cross-reactions and steric interference was not ruled out. This proactive investigation documented that antigenically diverse LPAIVs were active in all three components of the avian zoologic-wild bird interfaces at Ohio zoos (zoo birds, the environment, and wild birds). The resulting baseline data provides insight and justification for preventive medicine strategies for zoo birds.

Actividad del virus de la influenza A de baja patogenicidad en interfaces aviares en zoológicos de Ohio, 2006–2009.

Se inició esta investigación para examinar la actividad del virus de la influenza A en especies de aves en cuatro zoológicos del estado de Ohio, para comprender mejor la ecología de los virus de la influenza aviar en aves acuáticas silvestres y la posibilidad de la transmisión de estos virus en aves cautivas de zoológicos, tanto para especies nativas o extranjeras. Los esfuerzos de aislamiento del virus resultaron en la recuperación de tres aislamientos del virus de la influenza aviar de baja patogenicidad (uno H7N3 y dos H3N6) a partir de hisopos orofaríngeos o cloacales recolectados de más de 1,000 aves de zoológico que representaban a 94 especies. Además, 21 aislamientos del virus de la influenza aviar de baja patogenicidad de los subtipos H3N6, H4N6, H7N3 fueron recuperados de 627 (3.3%) muestras fecales ambientales recolectadas de hábitats al aire libre accesibles al zoológico y de aves silvestres. El análisis de los hisopos orofaríngeos y cloacales recolectados de patos de collar en libertad (Anas platyrhynchos) atrapados vivos en un zoológico en el año 2007 resultó en la recuperación de 164 aislamientos de influenza aviar de baja patogenicidad (en 48% de las muestras) que representaban a cinco subtipos de HA, a seis subtipos de NA y al menos a nueve combinaciones de HA-NA. Sin duda, la alta frecuencia de aislamientos se debe a la captura y alojamiento temporal de patos silvestres en un corral común antes de la reubicación. Mediante análisis serológicos utilizando el ensayo de inmunodifusión en gel de agar se detectaron anticuerpos específicos contra el virus de influenza tipo A en 147 de los 1237 (11.9%) sueros de aves zoológico y en 14 de 154 (9%) sueros pato de collar silvestre. Los análisis adicionales de un número limita