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Infection by Salmonella Enteritidis (SE) causes decreased egg production in laying hens. Immunoresponse, steroidogenesis, and cell proliferation by chicken granulosa cells (cGCs) are of particular interest because these changes are involved in follicular growth, atresia, and ovulation. To elucidate the possible mechanisms underlying these changes, transcriptional alterations in cGCs at distinct stages of follicular maturity were studied. Luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating hormone (FSH) were applied to the cGCs isolated from hierarchical and prehierarchical follicles, respectively, to imitate the effects of gonadotropin during in vitro SE infection. Results showed that the expression of Toll-like receptor 15 was dependent on the follicular maturity, with mature cells having a more significant and progressively stronger immunoresponse. Attenuated responses to LH and FSH as well as retardant steroidogenesis due to down-regulated LH receptor, FSH receptor, and the P450 side-chain cleavage system were observed and may have led to delayed hierarchical follicular growth. Deteriorated cell viability of prehierarchical follicles may occur, as the proliferation of stimulator heparin-binding epidermal growth factor was reduced significantly. Furthermore, the infection led to a higher probability of cGCs from the smaller follicles undergoing apoptosis than those from F1 follicles. Collectively, the data provide evidence of a tendency toward pathogen elimination in F1 follicles by induction of a strong immune response and cell apoptosis in smaller follicles to avoid bacterial transovarian infection. It is our speculation that slowed steroidogenesis and impeded follicular growth may play essential roles in decreased ovulation rate as well as further decreased egg production during SE infection.

La infección por Salmonella Enteritidis retarda la esteroidogénesis e impide el crecimiento celular de las células de la granulosa en la gallina.

La infección por Salmonella Enteritidis (SE) causa una disminución de la producción de huevo en gallinas de postura. La respuesta inmune, la esteroidogénesis, y la proliferación celular de las células de la granulosa de la gallina (cGCs) son de particular interés debido a que estos cambios están implicados en el crecimiento folicular, la atresia y la ovulación. Para dilucidar los posibles mecanismos subyacentes a estos cambios, se estudiaron las alteraciones transcripcionales en las células de la granulosa en distintas etapas de la maduración folicular. Se aplicaron la hormona luteinizante (LH) y la hormona folículo estimulante (FSH) a células de la granulosa aisladas de folículos jerárquicos y pre-jerárquicos, respectivamente, para imitar los efectos de la gonadotropina durante la infección por S. Enteritidis in vitro. Los resultados mostraron que la expresión de los receptores del tipo Toll 15 era dependiente de la madurez folicular, siendo las células maduras las que mostraron un respuesta inmune más significativa y progresivamente más fuerte. Las respuestas atenuadas a LH y FSH, así como la esteroidogénesis retardada debido a regulación a la baja de los receptores para LH, para FSH y para el sistema de escisión de la cadena lateral del P450 pudieron haber dado lugar al retraso en el crecimiento folicular jerárquico. Pudo haber ocurrido deterioro en la viabilidad celular de los folículos pre-jerárquicos tan pronto como se redujo significativamente la proliferación del factor de crecimiento epidérmico de unión a la heparina. Además, la infección condujo a una mayor probabilidad de las células de la granulosa de los folículos más pequeños a sufrir apoptosis en comparación con las células de los folículos F1. Colectivamente, los datos proporcionan evidencia de una tendencia hacia la eliminación de patógenos en los folículos F1 por la inducción de una fuerte respuesta inmune y de apoptosis c

Hemorrhagic nephritis enteritis of geese (HNEG) is an epizootic viral disease caused by infection with goose hemorrhagic polyomavirus (GHPV) that affects domestic geese. This study describes the epizootic analysis, laboratory diagnosis, and molecular characterization of GHPV isolates associated with HNEG cases in Poland. HNEG symptoms persisted in infected flocks for 2 wk with a 32% mortality rate. Primary gross lesions included hemorrhaging of the kidneys, intestines, and lungs. Histopathologic examination confirmed HNEG and identified that the causative agent was similar to other GHPV isolates and identical to the Toulouse 2008 isolate.

Nefritis y enteritis hemorrágica en una parvada de gansos en Polonia – Análisis del curso de la enfermedad y caracterización del agente etiológico.

La nefritis y enteritis de los gansos (con las siglas en inglés HNEG) es una enfermedad viral epizoótica causada por la infección con poliomavirus hemorrágico del ganso (GHPV) que afecta a los gansos domésticos. Este estudio describe el análisis epizoótico, el diagnóstico de laboratorio y la caracterización molecular de los aislamientos del virus de la nefritis y enteritis de los gansos asociados a casos de la enfermedad en Polonia. Los signos de la nefritis y enteritis de los gansos persistieron en las parvadas infectadas por dos semanas con una tasa de mortalidad del 32%. Lesiones macroscópicas primarias incluyeron hemorragia de los riñones, los intestinos y los pulmones. El examen histopatológico confirmó la enfermedad y se identificó que el agente causante era similar a otros aislamientos del virus de la nefritis y enteritis de los gansos e idéntico al aislamiento de Toulouse del año 2008.

The virulence of pigeon paramyxovirus type 1 (PPMV-1) for different species of birds was investigated in two independent sets of experiments in which groups of pigeons, chickens, turkeys, quails, and geese (10 birds per group) were inoculated with 10⁶ median embryo infectious doses of PPMV-1 isolate: 1) nonpassaged (nPPMV-1, intracerebral pathogenicity [ICPI] value  =  1.27) and 2) after six passages in specific-pathogen-free chickens (pPPMV-1, ICPI  =  1.46) via the oculonasal route. Naive birds were placed in contact with infected birds (two birds per group) to monitor virus transmission. Clinical observation was performed daily. Additionally, cloacal swabs, oropharyngeal swabs, and selected organ samples were collected on days 2, 4, 7, 10, and 14 postinfection and tested by real-time reverse transcriptase–PCR for estimation of viral shedding and distribution in tissues. Infected pigeons exhibited nervous and digestive tract symptoms, mortality, shedding, and transmission to contact birds. Chickens, turkeys, quails, and geese did not exhibit any clinical signs regardless of the PPMV-1 strain used for inoculation. However, in contrast to quails and geese, chickens and turkeys shed the virus via the oral cavity and cloaca, and transmission to contact birds was also observed. Viral RNA was identified in tissues collected from all pPPMV-1–infected birds, whereas negative results were obtained in the case of tissues taken from nPPMV-1–infected quails and geese. We conclude that the PPMV-1 used in this study was most virulent to pigeons, followed by chickens and turkeys, while quails and geese seem to have the highest level of innate resistance to this strain. However, passaging of PPMV-1 in chickens resulted in the increase of ICPI and noticeable but sometimes contrasting changes in the replication capacities of the virus.

Infección experimental en diferentes especies de aves con un paramixovirus de las palomas tipo 1. Evaluación de resultados clínicos, de la eliminación viral y la distribución en los tejidos.

Se estudió la virulencia de un paramixovirus de las palomas tipo 1 (PPMV-1) en diferentes especies de aves mediante dos grupos de experimentos independientes en los que se inocularon palomas, gallinas, pavos, codornices y gansos (10 aves por grupo) con 10⁶ dosis infectantes para embrión de pollo 50% de un aislamiento sin pasaje en pollos (nPPMV-1, con un índice de patogenicidad intracerebral [ICPI] de 1.27) y con el mismo virus después de seis pasajes en los pollos libres de patógenos específicos (pPPMV-1, con un índice ICPI de 1.46) a través de la ruta oculonasal. Aves susceptibles se pusieron en contacto con aves infectadas (dos aves por grupo) para monitorear la transmisión del virus. La observación clínica se realizó diariamente. Además, se recolectaron hisopos cloacales y orofaríngeos y muestras de órganos seleccionados en los días 2, 4, 7, 10, y 14 después de la infección y se analizaron mediantes transcripción reversa y PCR en tiempo real para la estimación de la excreción del virus y la distribución en los tejidos. Las palomas infectadas mostraron síntomas neurológicos y digestivos, mortalidad, eliminación viral y transmisión para las aves susceptibles en contacto. Los pollos, pavos, codornices, y gansos no mostraron signos clínicos independientemente de la cepa de paramixovirus de palomas utilizada para la inoculación. Sin embargo, en contraste con las codornices y gansos, los pollos y los pavos eliminaron el virus a través de la cavidad oral y por la cloaca, y también se observó la transmisión a las aves en contacto. Se identificó ARN viral en tejidos recolectados de todas las aves infectadas con el paramixovirus de las palomas, mientras que se obtuvieron resultados negativos en el caso de tejidos recolectados de codornices y gansos infectados con este paramixovirus. Se llegó a la conclusión de que el PPMV-1 utilizado en este estud

We analyzed 155,535 samples collected for surveillance of avian influenza viruses (AIVs), in the United States from 2007 to 2009, from migratory waterfowl (ducks, geese, and swans). The goal was to elucidate patterns of prevalence by flyway and functional groups to determine targets for future surveillance. Apparent prevalence of AIV was highest in the Pacific Flyway in 2007–2008 (14.2% and 14.1%, respectively), in the Mississippi Flyway in 2009 (16.8%), and lowest each year in the Atlantic Flyway (range, 7.3%–8.9%). Dabbling ducks had higher apparent prevalence of AIV (12.8%–18.8%) than diving ducks (3.9%–6.0%) or geese and swans (3.6%–3.9%). We observed highest apparent prevalence in hatch-year waterfowl (15.6%–18.9%). We further analyzed 117,738 of the 155,535 samples to test the hypothesis mallard (Anas platyrhynchos) had highest prevalence of AIV. We compared apparent prevalence and odds ratios for seven species of ducks and one species of goose commonly collected across the United States. Mallards had highest apparent prevalence (15%–26%) in half of comparisons made, whereas American green-winged teal (Anas creeca, 12%–13%), blue-winged teal (Anas discors, 13%–23%), northern pintail (Anas acuta, 16%–22%), or northern shoveler (Anas clypeata, 15%) had higher apparent prevalence in the remaining comparisons. The results of our research can be used to tailor future surveillance that targets flyways, functional groups, and species with the highest probability of detecting AIV.

Prevalencia del virus de la influenza aviar en aves acuáticas migratorias en los Estados Unidos, 2007–2009.

Se analizaron 155,535 muestras recolectadas para la vigilancia de los virus de influenza aviar (AIV), en los Estados Unidos desde el año 2007 al año 2009, procedentes de aves acuáticas migratorias (patos, gansos y cisnes). El objetivo fue determinar los patrones de prevalencia por vías migratorias y por grupos funcionales para determinar los objetivos de vigilancia en el futuro. La prevalencia aparente de influenza aviar fue más alta en la ruta migratoria del Pacífico durante los años 2007 y 2008 (14.2% y 14.1%, respectivamente), en la ruta migratoria del Mississippi en el 2009 (16.8%), y la más baja de cada año fue la ruta migratoria del Atlántico (rango 7.3%–8.9%). Los patos chapoteadores mostraron la mayor prevalencia aparente del virus de influenza aviar (12.8%–18.8%) en comparación con los patos buceadores (3.9%–6.0%) o gansos y cisnes (3.6%–3.9%). Se observó mayor prevalencia aparente en aves acuáticas de un año de edad (15.6%–18.9%). Posteriormente, se analizaron 117,738 de las 155,535 muestras para probar la hipótesis de que los ánades reales (Anas platyrhynchos) mostraban la mayor prevalencia de virus de influenza aviar. Se compararon la prevalencia aparente y las razones de momios para siete especies de patos y una especie de ganso comúnmente recolectados en los Estados Unidos. Los ánades reales tenían una mayor prevalencia aparente (15%–26%) en la mitad de las comparaciones realizadas, mientras que la cerceta común (Anas creeca, 12%–13%), el pato media luna (Anas discors, 13%–23%), ánade rabudo (Anas acuta, 16%–22%), o pato cuchara (Anas clypeata, 15%) tuvieron mayor prevalencia aparente en las comparaciones restantes. Los resultados de esta investigación se pueden utilizar para adaptar la vigilancia futura que se enfoque en las vías migratorias, grupos funcionales, y las especies con mayor probabilidad de detectar al virus de la influenza aviar.

The mature peptides of avian β-defensin-2 (AvBD-2), AvBD-6, and AvBD-12 were expressed as 6xHis-tagged recombinant proteins using the Escherichia coli BL21(DE3)pLysS system. The yields of rAvBD-2, rAvBD-6, and rAvBD-12 were approximately 0.92 mg/L, 1.24 mg/L, and 1.52 mg/L, respectively, of bacterial culture. The antimicrobial activities of rAvBDs were characterized under different salt, nutrient, and pH conditions. At concentrations of 8 µg/ml, 16 µg/ml, and 32 µg/ml, rAvBDs inhibited the growth of Staphylococcus aureus, E. coli, and Salmonella enterica serovar Typhimurium. While no synergistic inhibitory activity was found, a significant antagonistic effect was detected between rAvBD-2 and rAvBD-12. Treatment of E. coli and Salmonella Typhimurium with rAvBDs diminished their natural resistance to bile salts. Under the nonreplicating low-nutrient condition, rAvBDs at a concentration of 16 µg/ml were able to kill E. coli and S. aureus within 30 min of contact. The antimicrobial activities of rAvBDs were enhanced by lowering salt concentration and pH from 7 to 6. The antimicrobial potency against S. aureus and E. coli could be characterized as rAvBD-6 > rAvBD-2 > rAvBD-12, which coincided with the net positive charges of these peptides. In conclusion, data from the current study warrant the investigation of the potential use of rAvBD-2, -6, and -12 as therapeutic and prophylactic antimicrobial agents against common bacterial pathogens.

Expresión, purificación y caracterización comparativa in vitro de las beta defensinas -2, -6 y -12 aviares.

Los péptidos maduros de β-defensin-2 (AvBD-2), AvBD-6, y AvBD-12 aviares se expresaron como proteínas recombinantes con etiquetas de 6xHis utilizando el sistema de Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS. Los rendimientos de rAvBD-2, rAvBD-6 y de rAvBD-12 fueron de aproximadamente 0.92 mg/L, 1.24 mg/L y de 1.52 mg/L, de cultivo bacteriano, respectivamente. Las actividades antimicrobianas de rAvBDs se caracterizaron en diferentes condiciones de sal, de nutrientes y de pH. En concentraciones de 8 µg/ml, 16 µg/ml y 32 µg/ml, los péptidos rAvBD inhibieron el crecimiento de Staphylococcus aureus, de E. coli, y de Salmonella enterica serovar Typhimurium. Mientras que no se encontró ninguna actividad inhibidora sinérgica, se detectó un efecto antagonista significativo entre rAvBD-2 y rAvBD-12. El tratamiento de E. coli y de Salmonella Typhimurium con péptidos rAvBD disminuyó su resistencia natural a las sales biliares. Bajo la condición de bajo contenido de nutrientes no replicantes, los péptidos rAvBD en una concentración de 16 µg/ml fueron capaces de matar a E. coli y a S. aureus durante 30 minutos de contacto. Las actividades antimicrobianas de los péptidos rAvBD se aumentaron mediante la reducción de la concentración de sal y el pH de 7 a 6 La potencia antimicrobiana contra S. aureus y E. coli podría ser caracterizada como rAvBD-6 > rAvBD-2 > rAvBD-12, que coincidió con las cargas positivas netas de estos péptidos. En conclusión, los datos de este estudio justifican la investigación del uso potencial de rAvBD-2, -6, -12 y como agentes antimicrobianos terapéuticos y profilácticos contra patógenos bacterianos comunes.

Marek's disease (MD) presents a serious threat in poultry production. The disease has been limited for over 40 yr by protective vaccination. The widely applied vaccination against MD is also one of the factors causing evolutionary pressure onto field Marek's disease virus (MDV) virulent strains. Molecular evolution of MDV genes involved in oncogenesis may increase the pathogenicity of MDV virulent strains. The goal of the presented study was to sum up the molecular evolution of MDV field strains isolated in the last 40 yr in Poland. In total, 85 field MDV strains collected between 1974 and 2012 were propagated in chicken embryo fibroblasts. After DNA extraction, three sets of primers were designed for PCR complementary to the MDV076 (RLORF7) region encoding the meq oncogene as well to the MDV077 (23 kDa protein binding alpha-enolase) and MDV077.5 (RLORF6) genes. The obtained 85 MDV076, 60 MDV077, and 58 MDV077.5 cloned fragments were sequenced and aligned with the sequences of reference MDV strains showing different pathogenicity levels. The retrieved nucleotide (nt) and deduced amino acid sequences of RLORF7, 23 kDa protein, and LORF6 of Polish field strains showed several mutations and substitutions homologous to those observed in reference strains with a determined pathogenicity. The observed changes indicated the continuous evolution of field MDV strains. The RLORF7 nt sequence of analyzed MDV isolates showed similarity to virulent and very virulent MDV reference strains. The obtained 23 kDa and LORF6 nt sequences provided more important data and were more similar to mildly pathogenic strains than to virulent and very virulent MDV. The specific nt motifs in all three genes may indicate an increase of MDV virulence and were found in strains starting from 2006. According to the obtained results, the strains isolated in 2012 are similar to the very virulent plus MDV group. The study showed that RLORF7, 23 kDa protein, and RLORF6 fragments harbor sequence motifs that may have some association with MDV pathogenicity level. However, the exact role of the investigated regions in pathogenicity should be further examined by knock-out MDV strains. Also, the true MDV pathotype may only be determined by traditional in vivo experiments.

Evolución molecular de cepas de campo del virus de la enfermedad de Marek (MDV) en un período de 40 años.

La enfermedad de Marek (MD) presenta una seria amenaza para la producción avícola. La enfermedad ha sido limitada durante más de 40 años por la protección inducida por la vacunación. La vacuna ampliamente aplicada contra la enfermedad de Marek es también uno de los factores causantes de la presión evolutiva sobre las cepas virulentas del virus de la enfermedad de Marek. La evolución molecular de los genes implicados en la oncogénesis del virus de Marek puede aumentar la patogenicidad de cepas virulentas. El objetivo del estudio presentado fue resumir la evolución molecular de cepas de campo del virus de Marek aisladas en los últimos 40 años en Polonia. En total, 85 cepas de campo recolectadas entre 1974 y 2012 se propagaron en fibroblastos de embrión de pollo. Después de la extracción de ADN, se diseñaron tres conjuntos de iniciadores para llevar a cabo un método de PCR complementario a las regiones MDV076 (RLORF7) que codifica para el oncogene meq y también para los genes MDV077 (proteína de unión alfa-enolasa de 23 kDa) y para el gene MDV077.5 (RLORF6). Los fragmentos clonados obtenidos, 85 para el gene MDV076, 60 para el gene MDV077 y 58 para el gene MDV077.5, fueron secuenciados y se alinearon con secuencias de referencia del virus de la enfermedad de Marek que muestran diferentes niveles de patogenicidad. Las secuencias de nucleótidos y de aminoácidos deducidos de RLORF7, de la proteína de 23 kDa y LORF6 de cepas de campo polacas mostraron varias mutaciones y sustituciones homólogas a los observados en las cepas

In October of 2005 an outbreak of a vaccine-like strain of infectious laryngotracheitis (ILT), indistinguishable from the chicken embryo origin (CEO)-like vaccine strains, was detected by routine passive surveillance in the Central Valley of California, U. S. A. In response, a highly coordinated industry effort by two companies led to a significant decrease in the incidence of ILT over the same geographic region between 2008–2012. In order to understand the geographic and temporal spread of ILT in California before and after the outbreak, Global Information Systems (GIS) mapping coupled with spatial, temporal, and spatial-temporal statistics were used to identify retrospective and prospective low-rate clustering (i.e., less ILT than statistically expected) and high-rate clustering (i.e., more ILT than statistically expected) of ILT spatially and temporally. Results showed two high-rate retrospective spatial-temporal clusters and one low-rate prospective spatial-temporal cluster which were all statistically significant (P < 0.05). Overall, spatial-temporal clustering accounted for 36.9% of the positive ILT cases, while temporal clustering and spatial clustering done separately each accounted for 0% of the ILT cases, respectively. This demonstrates the utility of combining spatial and temporal clustering for ILT surveillance. Due to the risk of reversion to virulence and spread to immunologically naive broilers, future application of the CEO-based vaccine in the identified high rate spatial-temporal clusters should be avoided and other vaccine alternatives considered in order to avoid repeat outbreaks in those areas. This should especially be followed during the winter months of December, January, and February, which were found to have the highest prevalence of ILT (P < 0.05). Analysis of GIS data within the high-rate clusters showed that wind direction and farm density were minor factors in the spread of ILT. Shared roads may have played a role in the spread of ILT in one of the two high rate spatial-temporal clusters.

Epidemiología espacial y temporal de laringotraqueitis infecciosa en el centro de California: 2000–2012.

En octubre del 2005 un brote de una cepa similar a la vacuna contra la laringotraqueítis infecciosa (ILT), indistinguible de las cepas vacunales originadas en embrión de pollo (CEO), fue detectada mediante vigilancia pasiva de rutina en el Valle Central de California, en los Estados Unidos. En respuesta, un esfuerzo altamente coordinado de la industria por dos empresas dio lugar a una disminución significativa en la incidencia de laringotraqueítis durante la misma región geográfica entre los años 2008–2012. A fin de comprender la distribución geográfica y temporal de la laringotraqueítis en California antes y después del brote, se utilizaron Sistemas de Información Global (GIS), junto con las estadísticas espaciales, temporales y espacio-temporales para identificar la agrupación espacial y temporal de tasa baja retrospectiva y prospectiva (es decir, menor que la tasa esperada estadísticamente para la laringotraqueítis) y de agrupamiento de tasa alta (es decir, mayor que la tasa esperada estadísticamente para laringotraqueítis) para laringotraqueítis. Los resultados mostraron dos agrupamientos espaciales-temporales retrospectivos de tasa alta y una agrupación espacial-temporal prospectiva de tasa baja que fueron estadísticamente significativas (P <0.05). En general, la agrupación espacio-temporal representó el 36.9% de los casos positivos de laringotraqueítis, mientras que la agrupación temporal y la agrupación espacial por separado representó el 0% de los casos de laringotraqueítis, respectivamente. Esto demuestra la utilidad de la combinación de la agrupación espacial y temporal para la vigilancia de laringotraqueítis. Debido al riesgo de reversión a la virulencia y la diseminación a los pollos de engorde inmunológicam

Clostridium septicum and its associated cytolytic α toxin, along with several other clostridial species, has been implicated as the causative agent of gangrenous dermatitis. A recombinant noncytolytic C. septicum α toxin (NCAT) peptide was developed for use as a vaccine and demonstrated to be safe at concentrations as high as 1 mg/ml. NCAT, used as a purified antigen, partially purified antigen, or in combination with native antigens, was compared to salt-fractionated α toxin combined with denatured C. septicum bacteria (native) in a vaccination trial. Three-day-old poults were placed into one of five groups and received two, 0.2-ml vaccinations 5 wk apart. Subcutaneous challenge with 3.2 × 10⁷ log phase C. septicum resulted in 78% to 95% of the vaccinated birds surviving challenge compared to 48% of sham-injected controls. By ELISA analysis on NCAT-coated plates, birds receiving vaccines containing the recombinant NCAT peptide showed significantly higher blood serum antibody concentrations than did birds receiving vaccines containing native antigens or alum controls. Additionally, high levels of maternally transferred antibodies reactive to NCAT-purified antigens found in the pre-immune sera from naïve 3-day-old poults suggest that the tertiary structure of the NCAT peptide has a high homology to the native protein structure. In conclusion, our study showed that the use of a vaccine comprised of a noncytolytic recombinant α toxin peptide antigen provided clinical protection equal to the use of vaccines formulated with inactivated native proteins at a reduced overall cost.

Una proteína recombinante de la toxina α no citolítica induce protección en pavos contra el desafío con Clostridium septicum.

Clostridium septicum y su toxina α asociada, junto con varias otras especies clostridiales, ha sido implicado como el agente causal de la dermatitis gangrenosa. Se desarrolló un péptido de una toxina α recombinante no citolítica de C. septicum (NCAT) para su uso como una vacuna y demostró ser seguro en concentraciones tan altas como 1 mg/ml. El péptido NCAT, usado como un antígeno purificado, como antígeno parcialmente purificado, o en combinación con antígenos nativos, se comparó en un ensayo de vacunación con la toxina α fraccionada con sal, combinada con bacterias desnaturalizadas de C. septicum (nativas). Se colocaron pavipollos de tres días de edad en cinco grupos y recibieron dos vacunaciones con un volumen de 0.2 ml con cinco semanas de diferencia. El desafío por vía subcutánea con 3.2 × 10⁷ de C. septicum en fase logarítmica produjo una supervivencia del 78% a 95% de las aves vacunadas y desafiadas en comparación con el 48% observado con los controles inyectados con el tratamiento placebo. Mediante el análisis de ELISA con placas recubiertas con el péptido NCAT, las aves que recibieron vacunas que contenían el péptido NCAT recombinante mostraron concentraciones de anticuerpos en suero significativamente más altas en comparación con las aves que recibieron vacunas que contenían antígenos nativos o controles con alumbre. Además, los altos niveles de anticuerpos maternos transferidos reactivos contra los antígenos NCAT purificados encontrados en los sueros pre-inmunes de pavipollos no inoculados, de tres días de edad, sugieren que la estructura terciaria del péptido NCAT tiene una alta homología con la estructura de la proteína nativa. En conclusión, nuestro estudio mostró que el uso de una vacuna compuesta de un antígeno de péptido toxina α recombinante no citolítica proporcionó protección clínica similar a la observada con las vacunas formuladas con proteínas nativas inactivadas pero a un costo reducido.

Clostridial dermatitis (CD) is a production disease of commercial turkeys that is characterized by sudden mortality in market-aged male birds and by lesions that include fluid and air bubbles under the skin of the thigh, breast, and tail area. We have developed a model for CD using dexamethasone (Dex) injection that suggests this disease may be related to stressors during the last stages of turkey production. Male turkeys were provided with control feed and water or with feed supplemented with a commercial yeast extract (YE) product, water supplemented with vitamin D (VD), or the combination. At 6, 11, and 15 wk of age birds were treated with three intramuscular injections of Dex over a 5-day period. Both YE and VD, but not the combination, decreased early mortality. At week 7 mortality was increased by VD, and cellulitis lesions were seen in 7/8 mortalities. Mortality at week 12 was decreased by both YE and the combination of YE and VD, and cellulitis lesions were seen in 8/17 mortalities. There were no significant differences in mortality at week 16. Total mortality was 66 birds, and 23 of these had cellulitis lesions (38%). There were no YE-treated birds with CD lesions; however, 67% of VD-treated birds had CD lesions. This study suggests that feed supplementation with YE may improve the ability of turkeys to withstand the stressors during late production and provide protection against the development of CD; however, high levels of VD supplementation may be detrimental.

Efectos de la suplementación de vitamina D y del extracto de levadura en la mortalidad de pavos y en la incidencia de dermatitis clostridial en un modelo de inmunodepresión inducida por dexametasona.

La dermatitis clostridial es una enfermedad de la producción de pavos comerciales que se caracteriza por mortalidad súbita en los machos a la edad de mercado y por las lesiones que incluyen la presencia de fluido y burbujas de aire por debajo de la piel del muslo, pechuga y en la zona de la cola. Se desarrolló un modelo para la dermatitis clostridial usando dexametasona inyectable (Dex) y que sugiere que esta enfermedad puede estar relacionada con factores de estrés durante las últimas etapas de la producción del pavo. Se proporcionó a pavos machos alimento y agua de bebida controles o alimento suplementado con un producto de extracto de levadura comercial (YE), agua suplementada con vitamina D (VD), o su combinación. A las seis, 11 y 15 semanas de edad, las aves fueron tratadas con tres inyecciones intramusculares de dexametasona en un período de 5 días. Los tratamientos con extracto de levadura y de suplementación de vitamina D disminuyeron la mortalidad temprana pero no la combinación de ambos. En la semana 7 la mortalidad se incrementó en las aves tratadas con vitamina D y se observaron lesiones de celulitis en siete de ocho aves muertas. La mortalidad en la semana 12 se redujo con el tratamiento de levadura y con la combinación de levadura y vitamina D y se observaron lesiones de celulitis en ocho de 17 aves muertas. No hubo diferencias significativas en la mortalidad a la semana 16. La mortalidad total fue de 66 aves, 23 de ellas mostraron lesiones de celulitis (38%). No hubo aves tratadas con extracto de levadura que presentaran lesiones de dermatitis clostridial. Sin embargo, el 67% de las aves tratadas con vitamina D mostraron lesiones de dermatitis clostridial. Este estudio sugiere que la suplementación alimenticia con extracto de levadura puede mejorar la capacidad de los pavos para soportar los factores de estrés durante la producción tardía y ofrece protección contra el desarrollo de dermatitis clostridial. Sin embargo, los altos niveles de suplementación vitamina D pueden ser perjudiciales.

Pathogenicity and immune responses were characterized in commercial broilers and layers challenged with very virulent infectious bursal disease virus (vvIBDV) reassortants (vvIBDV segment A serotype 2 segment B and vvIBDV segment A classic virulent segment B) at 7 days of age. In addition, functional immunosuppression was evaluated after challenge with infectious bronchitis virus (IBV) at 15 days of age. Layers showed higher levels and increased persistence of IBDV- and IBV-specific maternal antibodies than broilers at 1, 13, and 28 days of age. Cytokine gene expression was evaluated, after IBDV challenge, as an indicator of the innate immune function. Similar results were detected between the groups inoculated with vvIBDV reassortants. Interleukin-1β (IL-1β) in the bursa of layers demonstrated down-regulation at 1 day postinfection (DPI; 8 days of age), and no changes at 4 DPI (11 days of age) compared with controls. In broilers, IL-6 expression in the bursa was down-regulated 1 DPI (8 days of age) and up-regulated at 4 DPI (11 days of age). A significant lymphoid depletion was detected at 21 DPI (28 days of age) in broilers exposed to a reassortant of vvIBDV segment A and classic virulent IBDV segment B. Finally, reduced specific antibodies against IBV measured 13 days after challenge were detected in layer and broiler chickens inoculated with a reassortant serotype 2 IBDV in segment B, suggesting functional immunosuppression. These results provide evidence indicating that current IBDV vaccination of breeders does not completely protect progeny chickens from challenge with reassortant vvIBDV.

Efectos en aves comerciales del desafío con virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa muy virulentos y reacomodados genéticamente.

Se caracterizaron la patogenicidad y la respuesta inmune en pollos de engorde y en aves de postura comerciales desafiados con el virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa muy virulentos (con las siglas en Inglés vvIBDV) reacomodados genéticamente (segmento A tipo vvIBDV segmento B del serotipo 2 y segmento A muy virulento segmento B clásico virulento) a los 7 días de edad. Además, se evaluó la inmunodepresión funcional después del desafío con el virus de la bronquitis infecciosa (IBV) a los 15 días de edad. Las aves de postura mostraron niveles más altos y una mayor persistencia de anticuerpos maternos específicos contra el virus de Gumboro y de la bronquitis infecciosa en comparación con los pollos de engorde en los días uno, 13, y 28 días de edad. Se evaluó la expresión de genes para citoquinas después de la exposición del virus de Gumboro, como un indicador de la respuesta inmune innata. Se detectaron resultados similares entre los grupos inoculados con los virus altamente virulentos reacomodados. La interleucina-1β (IL-1β) en la bolsa de las aves de postura mostró regulación a la baja en el día uno después de la inoculación (ocho días de edad), y sin cambios a los cuatro días después de la inoculación (11 días de edad), en comparación con las aves controles. En los pollos de engorde, la expresión de IL-6 en la bolsa mostró regulación a la baja al día uno de edad (8 días de edad) y regulación a la alta a los cuatro días después de la inoculación (11 días de edad). Se detectó despoblación linfoide significativa a los 21 días postinoculación (28 días de edad) en pollos de engorde expuestos a un virus con genoma reacomodado con un segmento A de cepa muy virulenta y un segmento B de cepa clásica virulenta. Por último, la reducción de anticuerpos específicos contra el virus de la bronquitis infecciosa frente a IBV detectados a los 13 días después del desafío se detectaron en las aves de postura y de pollos de engorde pollos inoculados con un virus reacomodado serotipo 2 en el segmento B, lo que sugiere inmunodepresión funcional. Estos resultados proporcionan evidencia que indica que la vacunación actual contra el virus de Gumboro en

Antemortem diagnosis of avian aspergillosis is very challenging. Diagnostic assays using blood samples would aid in an early and more definitive diagnosis. In the current study, detection of anti-Aspergillus antibodies, Aspergillus antigen, and Aspergillus toxin (fumigaclavine A), protein electrophoresis and measurement of acute-phase protein concentrations were performed on serum of 18 adult and plasma of 21 juvenile gyr–saker hybrid falcons (Falco rusticolus × Falco cherrug). Adult (n  =  15) and juvenile (n  =  18) falcons were experimentally inoculated with different dosages of the same strain of Aspergillus fumigatus and an additional three falcons from each age group were used as uninfected control animals. Blood samples were collected prior to inoculation and at 28 days postinoculation. Of the 33 inoculated falcons, 16 demonstrated clinical signs (vomiting, greenish urates, dyspnea, ruffled feathers) commonly associated with aspergillosis and in 14 falcons necropsy revealed aspergillosis granulomas confirmed by mycology and histopathology. Positive galactomannan results were rare, with only 3/15 positive samples from adult falcons and none in the juvenile birds. Most of the inoculated falcons showed an increase of serum amyloid A (66.7%) and haptoglobin (70.4%), but fumigaclavine A was not detected in the blood from any of the experimental animals. Elevated antibody indices were detected in 96.7% of the inoculated birds, but also in 66.7% of the controls. Significant decreases in albumin∶globulin ratio were obvious in 81.5% of the inoculated birds, including 100% of the birds with granulomas. Blood from falcons with granulomas demonstrated significantly increased concentration values of alpha 2 and β globulins, decreased percentages of prealbumin and albumin, and increased percentages of alpha 2 and β globulins compared to inoculated falcons without granulomas. In conclusion, acute-phase proteins and the electrophoretic profile of birds challenged with A. fumigatus show significant alterations, which in combination with other diagnostic procedures, assist in the early diagnosis of avian aspergillosis.

Comparación de las herramientas de diagnóstico para la detección de la aspergilosis en muestras de sangre de halcones infectados experimentalmente.

El diagnóstico antemortem de la aspergilosis aviar es muy difícil. Los ensayos de diagnóstico utilizando muestras de sangre podrían ayudar en el diagnóstico precoz y definitivo. En el estudio actual, se llevó a cabo la detección de anticuerpos anti-Aspergillus, la detección del antígeno de Aspergillus, y de la toxina de Aspergillus (fumigaclavina A), el análisis de proteínas por electroforesis y la medición de las concentraciones de proteínas de la fase aguda en suero de 18 halcones adultos y en 21 muestras de plasma de halcones juveniles híbridos gyr-saker (Falco rusticolus × Falco cherrug). Halcones adultos (n  =  15) y juveniles (n  =  18) fueron inoculados experimentalmente con diferentes dosis de la misma cepa de Aspergillus fumigatus y otros tres halcones adicionales de cada grupo de edad fueron utilizados como animales control no infectados. Se recolectaron muestras de sangre antes de la inoculación y a los 28 días después de la inoculación. De los 33 halcones inoculados, 16 mostraron signos clínicos (vómitos, excreción de uratos verdosos, disnea, plumas erizadas) comúnmente asociados con la aspergilosis y la necropsia de 14 halcones reveló granulomas por aspergilosis confirmados por el estudio de micología e histopatología. Resultados positivos de galactomananos fueron raros, con sólo tres de quince muestras positivas de los halcones adultos y ninguna de las aves jóvenes. La mayoría de los halcones inoculados mostraron un aumento del amiloide A sérico (66.7%) y de la haptoglobina (70.4%), per

Active surveillance for avian influenza (AI) viruses in poultry sold at live bird markets (LBMs) was conducted in 44 of 63 provinces throughout Vietnam over two periods from September 2011 to February 2012 and October 2012 to June 2013. The study objectives were to assess the prevalence of avian influenza type A, H5, and H5N1 subtype viruses and characterize the geographical and temporal distribution of H5N1 virus genetic variants across the country. Monthly sampling was conducted in 394 LBMs located in 372 communes. A total of 9790 oropharyngeal swabs from poultry were screened for influenza A virus by real-time reverse-transcriptase PCR. Virus isolation was attempted on all positive samples in embryonated chicken eggs, and the HA1 region of each H5 virus isolate was sequenced. Market prevalence of H5 subtype virus was 32.2% (127/394) over the cumulative 15 mo of surveillance. Phylogenetic analyses indicated that clade 1.1 viruses persisted in the south, whereas three genetically distinct subgroups of clade 2.3.2.1 were found simultaneously in northern, central, and southern Vietnam. Clade 2.3.2.1c viruses first appeared in July 2012 and spread rapidly to the center and south of Vietnam in late 2012, where they were predominant among clade 2.3.2.1 viruses and were detected in both active LBM surveillance and poultry outbreaks. Given the overlapping geographic distribution of clade variants and the antigenic divergence previously described for these clades, current AI poultry vaccines used in Vietnam may require bivalent formulations containing representatives of both clade 1.1 and clade 2.3.2.1 viruses.

Prevalencia y distribución de virus variantes de clado de la influenza aviar A H5N1 en mercados de aves vivas en Vietnam, 2011-2013.

Se llevó a cabo vigilancia activa para virus de influenza aviar (IA) en las aves que se venden en los mercados de aves vivas en 44 de 63 provincias de Vietnam por dos períodos entre septiembre del 2011 a febrero 2012 y entre octubre del 2012 hasta junio de 2013. Los objetivos del estudio fueron evaluar la prevalencia del virus de la influenza aviar tipo A, H5 y subtipo H5N1 y caracterizar la distribución geográfica y temporal de las variantes genéticas del virus H5N1 en todo el país. Se realizó un muestreo mensual en 394 mercados de aves vivas ubicados en 372 municipios. Un total de 9,790 hisopos orofaríngeos de aves fueron analizados para detectar la presencia de influenza A virus por transcripción reversa y PCR en tiempo real. Se intentó el aislamiento del virus en huevos embrionados de todas las muestras positivas y se secuenció la región de HA1 de cada aislamiento viral H5. La prevalencia en los mercados del subtipo H5 fue del 32.2% (127/394) acumulada durante los 15 meses de vigilancia. Los análisis filogenéticos indican que los virus del clado 1.1 persistieron en el sur, mientras que se encontraron tres subgrupos genéticamente diferentes del clado 2.3.2.1 al mismo tiempo en el norte, en el centro y en el sur de Vietnam. Los virus del clado 2.3.2.1c aparecieron por primera vez en julio de 2012 y se extendieron rápidamente al centro y sur de Vietnam a finales del 2012, donde predominaron dentro de los virus del clado 2.3.2.1 y se detectaron tanto en el muestreo activo de mercados de aves vivas y en los brotes avícolas. Considerando la superposición de la distribución geográfica de los clados variantes y la divergencia antigénica descrita previamente para estos subtipos, las vacunas actuales contra influenza aviar utilizadas en la avicultura de Vietnam pueden requerir formulaciones bivalentes que contengan virus representantes de ambos clados; clado 1.1 y clado 2.3.2.1.

Leucocytozoon caulleryi is an economically important poultry pathogen that causes subclinical to fatal disease in chickens. Because of limited preventive and treatment options against this disease, an oil-adjuvanted recombinant vaccine (O-rR7) targeting the R7 protein of L. caulleryi second-generation schizonts was developed. Different vaccination programs, namely, single vaccination at 45 days (0.1-ml dose), single vaccination at 130 days (0.25 ml), and initial vaccination at 45 days (0.1 ml) followed by a booster dose at 130 days (0.25 ml) were explored to compare the effects of single and booster vaccination on antibody response, duration of protective immunity, and degree of clinical signs after experimental L. caulleryi infection. Of the three treatments groups, initial vaccination at 45 days followed by a booster vaccination at 130 days of age resulted to rapid increase in antibody titers, which persisted for up to 182 days. Antibody titers reached peak values 35 days and 14 days after initial and booster vaccination, respectively. In comparison, single vaccination at 45 days of age resulted in production of antibodies above 1600 ELISA units for 56 days postvaccination, and single vaccination at 130 days of age produced peak antibody titers 35 days postvaccination, which remained above 1600 ELISA units for 126 days. Experimental infection of L. caulleryi at 256 days, when antibody titers had waned, did not result to severe clinical disease in chickens that received booster vaccination, whereas mild to severe disease was observed in chickens that received a single vaccination. Evaluation of immune response at 15 and 21 days postinfection showed that chickens that received booster vaccination had a twofold increase (P < 0.01) in antibody titers as compared to those receiving a single vaccination. Administering booster shots of O-rR7 is therefore recommended, especially in farms located in areas where Leucocytozoon is endemic.

Respuesta de anticuerpos e inmunidad protectora en pollos vacunados con una dosis de refuerzo de una vacuna recombinante de Leucocytozoon caulleryi con adyuvante oleoso.

Leucocytozoon caulleryi es un patógeno económicamente importante en la avicultura que causa una enfermedad que va de una presentación subclínica hasta una forma fatal en pollos. Debido a las opciones limitadas de prevención y tratamiento contra esta enfermedad, se desarrolló una vacuna recombinante con adyuvante oleoso (O-rR7) dirigidas a la proteína R7 de esquizontes de segunda generación de L. caulleryi. Se exploraron diferentes programas de vacunación, vacunación única a los 45 días (dosis de 0.1 ml), vacunación única a los 130 días (0.25 ml), y una vacunación inicial a los 45 días (0.1 ml), seguido de una dosis de refuerzo a los 130 días (0.25 ml), para comparar los efectos de la vacunación única y de refuerzo en la respuesta de anticuerpos, la duración de la inmunidad protectora y el grado de signos clínicos después de la infección experimental con L. caulleryi. De los tres grupos de tratamientos, la vacunación inicial a los 45 días, seguida de una dosis de refuerzo a los 130 días de edad resultó en un aumento rápido en los títulos de anticuerpos, que persistió hasta por 182 días. Los títulos de anticuerpos alcanzaron valores máximos 35 días y 14 días después de la vacunación inicial y de refuerzo, respectivamente. En comparación, la vacunación única a los 45 días de edad dio lugar a la producción de anticuerpos por arriba de 1600 unidades ELISA durante 56 días después de la inmunización y la vacunación única a los 130 días de edad produjo los títulos más altos de anticuerpos 35 días después de la vacunación, que se mantuvo por encima de 1600 unidades ELISA durante 126 días. La infección experimental de L. caulleryi a los 256 días, cuando los títulos de anticuerpos habían disminuido, no

An outbreak of egg-drop syndrome occurred on a Sheldrake duck farm in Longhai in Fujian Province, China, in 2012. The main clinical symptoms were sharply reduced egg production, crooked necks, and death. We isolated the virus from the sick ducks, identified it, and observed the histopathologic changes after viral infection. We detected viral RNA in the blood and feces of the infected ducks and developed a latex-agglutination diagnostic method to detect anti–Tembusu-virus antibodies. Our results show that the pathogenic virus is a Tembusu virus. The histopathologic changes included follicular cell degeneration and necrosis, follicular cavity filled with blood cells, massive necrosis in the brain, and degeneration and necrosis of the nerve and glial cells. When the transmission of the virus in the infected ducks was studied, the duck blood was positive for viral nucleic acid for up to 29 days, and the feces were positive for viral nucleic acid for up to 13 days. We successfully established a simple, rapid, and easy-to-use latex-agglutination diagnostic method for the detection of antibodies against duck Tembusu virus.

Aislamiento e identificación de la cepa LH del virus Tembusu de los patos y el desarrollo de un método diagnóstico de aglutinación con látex para la detección rápida de anticuerpos.

Se produjo un brote con un síndrome de baja de la postura en una granja de patos tarro blancos en Longhai, provincia de Fujian, en China, en el año 2012. Los principales síntomas clínicos fueron una reducción drástica de la producción de huevos, cuellos torcidos, y muerte. Se aisló el virus de los patos enfermos, se identificó y se observaron cambios histopatológicos después de la infección viral. Se detectó el ARN viral en la sangre y en las heces de los patos infectados y se desarrolló un método de diagnóstico mediante aglutinación de látex para detectar anticuerpos contra el virus Tembusu. Los resultados muestran que el virus patógeno es el virus Tembusu. Los cambios histopatológicos incluyeron degeneración y necrosis celular folicular, la cavidad folicular estaba llena de células sanguíneas, necrosis masiva en el cerebro y degeneración y necrosis de nervios y células gliales. Cuando se estudió la transmisión del virus en los patos infectados, la sangre de pato fue positiva para la presencia el ácido nucleico viral por un máximo de 29 días, y las heces fueron positivas para la presencia del ácido nucleico viral por un máximo de 13 días. Se estableció con éxito un método de diagnóstico simple, rápido y fácil de usar mediante aglutinación con látex para la detección de anticuerpos contra el virus de Tembusu de los patos.

Seroprevalence studies on respiratory pathogens have been done extensively in commercial laying hens, broilers, and, to a lesser extent, backyard poultry. In Europe, seroprevalence studies in backyard and fancy breed poultry flocks are scarce and limited to a few pathogens, such as Mycoplasma gallisepticum (MG); others, such as Ornithobacterium rhinotracheale (ORT), are missing. A commercial ELISA for detection of antibodies against six selected pathogens was performed on 460 serum samples from chickens across Flanders. Anti-ORT antibodies were, by far, the most prevalent, with a prevalence of 95.4%. Infectious bronchitis virus, Mycoplasma synoviae, and avian metapneumovirus antibodies were found in 75.6%, 76.3%, and 63.5% of the animals, respectively. Antibodies against MG and infectious laryngotracheitis virus were found in 36.7% and 30% of the animals, respectively. These data demonstrate the high seroprevalence of respiratory pathogens among hobby poultry; therefore, it is possible that this group could act as a reservoir for commercially kept poultry.

Nota de investigación- Alta seroprevalencia de patógenos respiratorios en avicultura recreativa.

Se han realizado amplios estudios de seroprevalencia de patógenos respiratorios en gallinas de postura, en pollo de engorde comerciales y en menor medida, en aves de traspatio. En Europa, los estudios de seroprevalencia en parvadas de aves de traspatio y en aves de razas finas son escasos y limitados a unos pocos patógenos, como Mycoplasma gallisepticum y no existen disponibles reportes dirigidos a otros patógenos como Ornithobacterium rhinotracheale. Se llevó a cabo un estudio serológico con un estuche comercial de ELISA para la detección de anticuerpos contra seis patógenos seleccionados en 460 muestras de suero de pollos en toda el área de Flandes. Los anticuerpos contra Ornithobacterium rhinotracheale fueron los más frecuentes, con una prevalencia del 95.4%. Los anticuerpos contra el virus de la bronquitis infecciosa, Mycoplasma synoviae, y metapneumovirus aviar se encontraron en 75.6%, 76.3% y 63.5% de los animales, respectivamente. Se encontraron anticuerpos contra el virus de la laringotraqueitis infecciosa y contra Mycoplasma gallisepticum en 36.7% y 30% de los animales, respectivamente. Estos datos demuestran la alta seroprevalencia de patógenos respiratorios en la avicultura recreativa; por lo tanto, es posible que este grupo podría actuar como un reservorio para las aves mantenidas bajo condiciones comerciales.

Avian pathogenic Escherichia coli (APEC) isolates are currently differentiated from nonpathogenic strains by classical PCR of virulence genes. This study improves the detection of the five main virulence genes used for APEC detection with the development of duplex and single Taqman real-time PCR to these targets. Primers and probes targeted to ompT, hlyF, iroN, iutA, and iss genes were designed and used in the implementation of single (iss) and duplex (hlyF/ompT and iroN/iutA) Taqman PCR assays. All five virulence genes of E. coli strains were successfully detected by classical and Taqman real-time (single and duplex) PCR. A panel of 111 E. coli isolates, obtained from avian samples collected in different Brazilian regions between 2010 and 2011, were further tested by both assays. Complete agreement was observed in the detection of four genes, ompT, hlyF, iron, iutA, but not for iss. This issue was addressed by combining the forward primer of the classical PCR to the new iss reverse primer and probe, resulting in complete agreement for all five genes. In total, 61 (55%) Brazilian E. coli isolates were detected as APEC, and the remaining 50 (45%) as avian fecal E. coli (AFEC). In conclusion, classical and Taqman real-time PCR presented exactly the same analytical performance for the differentiation of APEC and AFEC isolates. The developed real-time Taqman PCR assays could be used for the detection and differentiation of APEC isolates.

Nota de Investigación- Métodos de PCR en tiempo real TaqMan para la detección rápida de aislamientos de Escherichia coli patógenos para las aves.

Los aislamientos de Escherichia coli patógenos para las aves (con las siglas en inglés APEC) actualmente se pueden diferenciar de cepas no patógenas mediante métodos de PCR clásicos para genes de virulencia. Este studio actual mejoró la detección de los cinco genes de virulencia principales utilizados para la detección de APEC con el desarrollo métodos de PCR en tiempo real TaqMan de tipo dúplex y sencillo para estas secuencias objetivo. Los iniciadores y sondas específicas para ompT, hlyF, iroN, iutA, y los genes iss fueron diseñados y utilizados en la ejecución de un ensayo de PCR en tiempo real TaqMan simple (iss) y dúplex (hlyF/ompT and iroN/iutA). Los cinco genes de virulencia de cepas de E. coli se detectaron con éxito por PCR clásico y en tiempo real TaqMan (simple y dúplex). Un panel de 111 aislamientos de E. coli, obtenidos a partir de muestras de aves, recolectadas de diferentes regiones de Brasil entre los años 2010 y 2011, se analizaron mediantes ambos ensayos. Se observó concordancia completa en la detección de cuatro genes, ompT, hlyF, iroN, iutA, pero no para iss. Este problema fue solucionado mediante la combinación del iniciador delantero de PCR clásico con el iniciador de reversa y la sonda del gene iss, lo que resulta en una concordancia completa para los cinco genes. En total, 61 (55%) de aislamientos brasileños de E. coli se detectaron como APEC y los 50 restantes (45%) se identificaron con cepas de E. coli aviares de origen fecal (AFEC). En conclusión, el método de PCR clásico y en tiempo real TaqMan presentan exactamente el mismo rendimiento analítico para la diferenciación de aislamientos de E. coli patógenos para aves y de origen fecal. El ensayo de PCR en tiempo real TaqMan podría ser utilizado para la detección y diferenciación de aislamientos de E. coli patógenos para aves.

H6 subtype avian influenza virus, which has been circulating among different species, causes considerable concern for both veterinary medicine and public health. We isolated a strain of H6N2 avian influenza virus from healthy green peafowl (Pavo muticus) in Qinghuangdao Wildlife Park in Hebei Province, China, in 2012. A phylogenetic analysis indicated that the isolated H6N2 strain had the same gene constellation as southern China strains, which were predominantly isolated from waterfowl distributed in Shantou, Guangxi, and Hunan in 2001–2010. The isolate showed no and low pathogenicity in chickens and ducks, respectively. However, it replicated efficiently in the lungs and turbinate of infected mice, resulting in thickened alveolar septa and moderate interstitial pneumonia. This finding raises concerns that the H6N2 subtype maybe evolve into a novel endemic avian influenza virus. Therefore, periodical surveillance of avian influenza viruses must be undertaken to monitor the advent of novel viruses.

Análisis filogenético y patogénico de un virus nuevo de la influenza aviar H6N2 aislado de un pavo real verde en un parque de vida silvestre.

Un virus de la influenza aviar subtipo H6, que ha estado circulando en diferentes especies, ha provocado gran preocupación tanto en medicina veterinaria y salud pública. Se aisló una cepa del virus de la influenza aviar H6N2 de un pavo real verde saludable en el parque de vida silvestre Qinghuangdao en el año 2012. El análisis filogenético indicó que la cepa H6N2 aislada tenía la misma constelación de genes que las cepas del sur de China, que se aislaron principalmente de aves acuáticas distribuidas en Shantou, Guangxi, y Hunan en los años 2001 al 2010. El aislamiento mostró nula y baja patogenicidad en pollos y patos por separado. Sin embargo, se replicó de manera eficiente en los pulmones y en los cornetes de ratones infectados, lo que resultó en engrosamiento de septos alveolares y neumonía intersticial moderada. Este hallazgo plantea la preocupación de que el subtipo H6N2 tal vez evolucione en un nuevo virus de la influenza aviar endémica. Por lo tanto, la vigilancia periódica de los virus de la influenza aviar debe llevarse a cabo para controlar la aparición de nuevos virus.

Actinobacillus pleuropneumoniae is the causal agent of porcine pleuropneumonia, which is a highly contagious respiratory disease that affects swine nearly exclusively. An isolate with characteristics of some Pasteurellaceae family members (Gram-negative bacterium, pleomorphic, and NAD-dependent) was isolated from layer hens showing clinical signs of infectious coryza. This bacterium presented hemolysis on rabbit red blood cell agar plates, and PCR amplification and sequencing of its 16S rDNA gene indicated 99% identity with A. pleuropneumoniae serotypes 3 and 7. The presence of a putative apxIIA gene was also determined by PCR. A single, smooth colony of this bacterium inoculated in five, 7-day-old chicken embryos via the yolk sac route induced 100% mortality. However, inoculation into 10-wk-old, specific-pathogen-free chickens induced only light facial swelling, and reisolation of the inoculated bacterium was negative.

Reporte de caso—Aislamiento de Actinobacillus pleuropneumoniae de gallinas de postura con signos clínicos de coriza infecciosa.

Actinobacillus pleuropneumoniae es el agente causal de la pleuroneumonía porcina, una enfermedad respiratoria altamente contagiosa que ha sido considerada que afecta casi exclusivamente a los cerdos. Se obtuvo un aislamiento con características de algunos de los miembros de la familia Pasteurellaceae (bacteria Gram negativa, pleomórfica y dependiente de NAD) a partir de gallinas de postura que mostraban signos clínicos de coriza infecciosa. Esta bacteria produjo hemólisis en placas de agar sangre de conejo. La amplificación por PCR del gene rDNA 16S y su secuenciación indicó una identidad del 99% con el rDNA de A. pleuropneumoniae serotipos 3 y 7. La presencia de un supuesto gene apxIIA también determinada por PCR. Cuando se inocularon cinco huevos embrionados de pollo de siete días de edad con una colonia lisa de esta bacteria a través del saco vitelino se observó 100% de mortalidad. Sin embargo, su inoculación en aves libres de patógenos específicos de 10 semanas de edad indujo únicamente una inflamación facial ligera, y el re-aislamiento de la bacteria inoculada fue negativo.

Two broiler chicken houses containing 17,500 chicks each experienced an extreme elevation in chick mortality beginning on day 3 after placement. Clinical signs observed upon farm visit included numerous small chicks for their age; depressed, lethargic, and comatose chicks; and chicks huddling near feed pans and under heaters. Necropsied chicks were markedly pale and had atrophy of the thymus and bursa, swollen and edematous proventriculus, erosions in the koilin and in the proventricular-ventricular junction, pale kidneys, and yellowish to brownish-orange liver often with linear pale areas. The chicks had watery blood and hematocrits measured from 9.5% to 18%. Chicken infectious anemia was initially suspected based on the clinical signs and gross lesions. Histopathology revealed multifocal acute hepatic degeneration and necrosis with golden-brown pigment in the cytoplasm of hepatocytes and Kupffer cells, moderate to severe koilin degeneration and fragmentation, multifocal mild to moderate proventricular necrosis, mild to moderate necrosis and loss of enterocytes, blunting of small intestinal villi, lymphoid depletion in the thymus and bursa, erythrophagocytosis in the liver and spleen, and acute renal tubular degeneration and necrosis. Special stains revealed mild to abundant accumulation of copper pigment in the cytoplasm of hepatocytes and iron pigment in the cytoplasm of Kupffer cells. Feed analysis revealed 2140 to 2393 parts per million of copper in the starter ration, and heavy metal analysis detected markedly elevated copper levels in formalin-fixed samples of the liver. Excessive amounts of tribasic copper chloride in the starter ration caused copper toxicosis in these chicks. Similar clinical signs and lesions were reproduced when the suspect feed was used in an experimental pen trial.

Reporte de Caso—Toxicidad por cloruro de cobre tribásico en pollos de engorde comerciales.

Dos casetas de pollo de engorde que contenían 17,500 pollos cada una experimentaron una elevación extrema de la mortalidad a partir del tercer día después de la introducción de las aves. Los signos clínicos observados durante la visita incluyeron la presencia de un gran número de pollos pequeños para la edad; aves deprimidas, letárgicas, y en estado de coma, también se observaron pollos amontonándose cerca de los comederos y de las criadoras. Durante la necropsia, los pollos mostraron palidez y atrofia marcadas en el timo y en la bolsa de Fabricio, proventrículos edematosos, erosiones de la capa queratinizada de la molleja y en la unión entre el proventrículo y la molleja, palidez de riñones e hígados con coloración marrón-amarillenta con frecuentes áreas pálidas lineares. Los pollos tenían sangre acuosa y hematocritos con un rango de 9.5% a 18%. Inicialmente, se sospechó de anemia infecciosa del pollo con base en los signos clínicos y las lesiones macroscópicas. La histopatología reveló degeneración hepática aguda multifocal y necrosis con pigmento de color oro-marrón en el citoplasma de los hepatocitos y de las células de Kupffer, degeneración moderada a severa y fragmentación de la capa queratinizada de la molleja, necrosis proventricular multifocal de leve a moderada, necrosis de leve a moderada de intestino con pérdida de enterocitos y acortamiento de las vellosidades del intestino delgado, despoblación linfoide en el timo y la bolsa de Fabricio, eritrofagocitosis en el hígado y el bazo, y degeneración tubular renal aguda y necrosis. Las tinciones especiales revelaron acumulación de leve a abundante de pigmento de cobre en el citoplasma de los hepatocitos y pigmento de hierro en el citoplasma de las células de Kupffer. El análisis del alimento reveló la presencia de 2140 a 2393 partes por millón de cobre en la ración de iniciación. El análisis de metales pesados detectó niveles marcadamente elevados de cobre en muestras de hígado fijadas en formalina. La cantidad excesiva

This study describes an outbreak of necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens type A in captive macaws (Ara ararauna). Two psittacine birds presented a history of prostration and died 18 hr after manifestation of clinical signs. The necropsy findings and histopathologic lesions were indicative of necrotic enteritis. Microbiologic assays resulted in the growth of large gram-positive bacilli that were identified as C. perfringens. PCR was used to identify clostridium toxinotypes and confirmed the identification of isolated strains as C. perfringens type A, positive to gene codifying beta 2 toxin. The infection source and predisposing factors could not be ascertained.

Reporte de Caso—Enteritis por Clostridium perfringens tipo A en guacamayos azul y amarillo (Ara ararauna).

Este estudio describe un brote de enteritis necrótica causada por Clostridium perfringens tipo A en guacamayos azul y amarillo (Ara ararauna). Dos aves psitácidas presentaron una historia de postración y murieron 18 horas después de la manifestación de los signos clínicos. Los resultados de la necropsia y las lesiones histopatológicas fueron indicativos de la enteritis necrótica. Los ensayos microbiológicos dieron como resultado el crecimiento de bacilos gram-positivos grandes que fueron identificados como C. perfringens. Se utilizó PCR para identificar los tipos de toxinas clostridiales y este método confirmó la identificación de las cepas aisladas como C. perfringens tipo A, positivas para el gene que codifica para la toxina beta 2. La fuente de la infección y los factores predisponentes no se pudieron determinar.

Until now, Enterococcus cecorum (EC) has been known as a pathogen for broilers, broiler breeders, and Pekin ducks. In the present report, we describe a fatal systemic EC infection in a young racing pigeon (Columba livia forma domestica). EC was isolated from the heart, liver, spleen, and intestine of the bird in pure culture. In the pathologic examination, the pigeon showed enteritis and an ulcerative gastritis, which may have been predisposing factors for the development of the generalized EC infection. An accumulation of gram-positive cocci in spleen tissue was found in the histopathologic examination and confirms the presence of a systemic EC infection in the pigeon. Additionally, EC was isolated from cloacal swabs of other pigeons in the same loft, but no additional pigeons were submitted for necropsy. All EC isolates tested were negative by PCR for the enterococcal virulence factors cytolysin, enterococcal surface protein, aggregation substance, hyaluronidase, and gelatinase. Therefore, the reason for the enhanced virulence of the EC isolate remains unknown. Our report confirms EC as a disease-causing agent in pigeons and presents the first data concerning the analysis of EC for virulence factors.

Reporte de Caso—Infección por Enterococcus cecorum en una paloma mensajera.

Hasta esta fecha, el Enterococcus cecorum (CE) ha sido reconocido como un patógeno para los pollos de engorde, reproductoras pesadas y patos Pekín. En el presente informe se describe una infección sistémica fatal por E. cecorum en una paloma mensajera (Columba livia forma domestica) joven. Se aisló E. cecorum de corazón, hígado, bazo e intestino del ave en cultivo puro. En el examen patológico, la paloma mostró enteritis y una gastritis ulcerativa, que pueden haber sido factores predisponentes para el desarrollo de la infección generalizada por E. cecorum. Mediante el examen histopatológico se observó acumulación de cocos grampositivos en el tejido del bazo y confirma la presencia de la infección sistémica por E. cecorum en la paloma. Además, se aisló E. cecorum de hisopos de cloaca de otras palomas en el mismo palomar, pero no se sometieron palomas adicionales a la necropsia. Todas las cepas aisladas de E. cecorum fueron negativas por PCR para los factores de virulencia para enterococos como la citolisina, la proteína de superficie de enterococos, la sustancia de, hialuronidasa, y gelatinasa. Por lo tanto, la razón de la mayor virulencia de esta cepa de E. cecorum sigue siendo desconocida. Nuestro informe confirma a E. cecorum como agente causante de la enfermedad en palomas y presenta los primeros datos relativos al análisis de los factores de virulencia de E. cecorum.

A broiler breeder flock was subcutaneously vaccinated at the hatchery with a live avian orthoreovirus (ARV) vaccine against viral arthritis. Chicks began to die at 3 days of age and postmortem examination revealed massive subcutaneous hemorrhages and edema on the dorsal aspect of the neck at the site of vaccination, a severe necrotic hepatitis, and pulmonary edema. Microscopically, the main lesion was a multifocal vacuolar degeneration and necrosis of randomly distributed small groups of hepatocytes with presence of apoptotic and multinucleated syncytial cells. Necrotic foci were also found in the lungs as well as a hemorrhagic, granulomatous, and heterophilic cellulitis and myositis of the neck and a generalized depletion and lymphocytolysis of lymphoid organs. At 8 days of age, birds also began to show hock swelling histologically characterized by a fibrinoleucocytic inflammation of the articulation and tendon sheaths, with hyperplasia of the synovial membrane, and lymphoplasmocytic infiltration. PCR and viral culture of livers were positive for ARV. Partial sequencing of the S1 gene from the virus isolate showed 99.2% to 99.8% homology with three vaccinal strains (ARV S1133, 1733, and 2408). Viral particles compatible with reovirus virions were observed at transmission electron microscopy. Investigation at the hatchery revealed that chicks were inadvertently administered an S1133 reovirus vaccine labeled for water administration in 10- to 17-week-old chickens. This human error is most likely the reason for this unusually severe viremic reovirus infection that affected this flock at such an early age.

Reporte de caso- Infección postvacunal por reovirus con alta mortalidad en pollos reproductores.

Se vacunó una parvada de reproductoras pesadas por vía subcutánea en la incubadora con una vacuna viva de orthoreovirus aviar (ARV) contra la artritis viral. Los pollos comenzaron a morir a los tres días de edad y el examen post mortem reveló hemorragias masivas y edema subcutáneo en el sitio de vacunación en la parte dorsal del cuello, también se observó hepatitis necrótica severa y edema pulmonar. Microscópicamente, la lesión principal fue degeneración vacuolar y necrosis multifocal de pequeños grupos de hepatocitos con distribución aleatoria y con presencia de células apoptóticas y sincitiales multinucleadas. También se encontraron focos necróticos en los pulmones, así como celulitis y miositis hemorrágicas, granulomatosas del cuello y una despoblación generalizada y lisis de linfocitos en los órganos linfoides. A los ocho días de edad, las aves también comenzaron a mostrar inflamación de los corvejones, caracterizada histológicamente por la presencia de leucocitos y fibrina en la articulación y en las vainas tendinosas, con hiperplasia de la membrana sinovial e infiltración por linfocitos y células plasmáticas. Las pruebas de PCR y de cultivo viral de hígados fueron positivos para reovirus aviar. La secuenciación parcial del gene S1 de la cepa viral aislada mostró 99.2% a 99.8% de similitud con tres cepas vacunales (S1133, 1733 y 2408). Se observaron partículas virales compatibles con viriones de reovirus mediante microscopía electrónica de transmisión. La investigación en la incubadora reveló que se administró en forma inadvertida en los pollos una vacuna contra el reovirus cepa S1133 autorizada para su administración en agua de bebida en aves de 10 a 17 semanas de edad. Es muy probable que un error humano haya sido la causa de esta infección peculiarmente severa por reovirus que afectó a esta parvada a una edad tan temprana.

Botulism is a paralytic disease caused by the botulinum neurotoxin produced by Clostridium botulinum. In the summer season in Korea, intensive outbreaks of avian botulism were reported in both poultry and wild birds, including five Korean native chicken farms (HanHyup NO.3), one pheasant (Phasianus colchicus karpowi) farm, and one community of spot-billed ducks (Anas poecilorhyncha). The affected domestic birds showed 24.5% to 58.3% mortality, with specific clinical signs including ataxia, limber neck, and diarrhea. To confirm the botulinum toxin, neutralization tests were performed on sera (four Korean native chicken farms and one pheasant farm) or culture supernatant (spot-billed ducks). Additionally, the contents of the cecum and liver from poultry presenting signs suggestive of botulism were inoculated to isolate the pathogen. The toxin genes were then detected by polymerase chain reaction (PCR). Through the neutralization tests, it was possible to diagnose the botulism and, except in the case of one Korean native chicken farm, to identify the type of pathogen. Using detection by PCR, except in two cases of the Korean native chicken farms, the botulinum toxin gene was found. Additionally, in four cases, it was possible to identify the C/D mosaic type using PCR. This paper reports the first occurrence of avian botulism in domestic birds and the first detection of botulism caused by this mosaic type in Korea.

Reporte de caso – Presentación de botulismo aviar en Corea durante el período de junio a septiembre del año 2012.

El botulismo es una enfermedad paralítica causada por la neurotoxina botulínica producida por Clostridium botulinum. Durante el verano, se registraron brotes de botulismo aviar intensivos tanto en aves comerciales y silvestres, incluyendo cinco granjas de pollos nativos (HanHyup NO.3) de Corea, una granja de faisanes (Phasianus colchicus karpowi) y una comunidad de ánades picopintos (Anas poecilorhyncha). Las aves domésticas afectadas mostraron de 24.5% a 58.3% de mortalidad, con signos clínicos específicos que incluyeron ataxia, flexibilidad de cuellos y diarrea. Para confirmar la presencia de la toxina botulínica, se realizaron pruebas de neutralización con suero (cuatro granjas de pollo nativo de Corea y una granja de faisanes) o con sobrenadante de cultivo (ánades picopintos). Además, los contenidos del ciego y el hígado de las aves comerciales que presentaban signos sugestivos de botulismo se inocularon para aislar el patógeno. Los genes de toxina fueron detectados mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Mediante pruebas de neutralización se pudo diagnosticar botulismo y con excepción de un caso de una granja de pollos nativos de Corea, se pudo identificar el tipo de patógeno. Mediante la detección por PCR se encontró el gene de la toxina botulínica, excepto en dos casos de las granjas de pollos nativos coreanos. Además, en cuatro casos, fue posible identificar la mezcla de los tipos C/D mediante PCR. Este trabajo presenta el primer reporte de botulismo aviar en aves domésticas y la primera detección de botulismo causado por la mezcla de estos tipos en Corea.

Please see the PDF version of the Table of Contents, 2014.