El objetivo principal de este estudio fue identificar el compuesto mayoritario de una fracción (F3) de hojas de Dodonaea viscosa con actividad afidicida contra Melanaphis sacchari. El 3-O-rutinósido de quercetina (rutina) fue aislado de F3 por técnicas cromatográficas convencionales e identificado por resonancia magnética nuclear y análisis de cromatografía liquida de alta resolución (HPLC). La fracción F3 obtenida de un extracto metanólico de D. viscosa (DvEM), exhibió una actividad afidicida del 70% frente a M. sacchari en una concentración de 10,000 ppm a las 72 horas en dieta artificial. El insecticida imidacloprid produjo 100% de mortalidad de los áfidos, mientras que la mortalidad en el control fue 5%. Pruebas fitoquímicas clásicas comprobaron la presencia de alcaloides, flavonoides, taninos, cumarinas, antracenos, saponinas, triterpenos, y/o esteroides, en DvEM, para identificar los grupos de compuestos presentes y así llevar a cabo la estrategia de separación química. El perfil químico de DvEM realizado por HPLC indica que la fracción F3 está constituida por flavonoides, destacando la presencia de rutina. Este flavonol aislado de F3 fue caracterizado por RMN de ¹H y ¹³C. Los resultados demostraron que este tipo de flavonoides mayoritarios en DvEM pueden ser considerados como una alternativa para el desarrollo de nuevos insecticidas, constituyendo una opción ante los productos químicos tóxicos que actualmente se encuentran en el mercado.