Control of pathogenic avian mycoplasmas can consist of one of three general approaches: Maintaining flocks free of infection, medication, or vaccination. Maintaining flocks free of pathogenic mycoplasmas consists of maintaining replacements from mycoplasma-free sources in a single-age, all-in all-out management system. Good biosecurity and an effective monitoring system are necessary aspects of this program. Medication can be very useful in preventing clinical signs and lesions, as well as economic losses, but cannot be used to eliminate infection from a flock and is therefore not a satisfactory long-term solution. Vaccination against Mycoplasma gallisepticum (MG) or M. synoviae (MS) can be a useful long-term solution in situations where maintaining flocks free of infection is not feasible, especially on multi-age commercial egg production sites.

Comentario por Invitación—Control de las infecciones por Micoplasma en la avicultura comercial.

El control de los micoplasmas patógenos aviares puede estar relacionado con uno de los tres siguientes enfoques: Mantenimiento de los lotes libres de la infección, utilizando la medicación, o practicando la vacunación. El mantenimiento de los lotes libres de la infección con micoplasmas patógenos consiste en mantener las aves que se reciben procedentes de parvadas libres de micoplasma, en granjas de una sóla edad practicando el sistema de manejo todos dentro todos fuera. Los aspectos necesarios de este programa consisten en mantener buena bioseguridad y un sistema efectivo de seguimiento y análisis de laboratorio. La medicación puede ser muy útil para prevenir los signos clínicos y las lesiones lo mismo que las pérdidas económicas, pero no puede usarse para eliminar la infección de un lote y no es una solución satisfactoria a largo plazo. La vacunación contra Mycoplasma gaalisepticum y Mycoplasma synoviae puede ser una solución útil a largo plazo en situaciones donde no es posible mantener los lotes de aves libre de micoplasma, especialmente en granjas de producción comercial de huevos que tienen múltiples edades.

Abbreviations: ELISA = enzyme-linked immunosorbent assay; HI = hemagglutination inhibition; IGSR = intergenic spacer region; MG = Mycoplasma gallisepticum; MI = M. iowae; MM = M. meleagridis; MS = M. synoviae; PCR = polymerase chain reaction; RAPD = random amplified polymorphic DNA; SPA = serum plate agglutination

House flies (Musca domestica) and little house flies (Fannia canicularis) were examined for their ability to take up and harbor a velogenic strain of exotic Newcastle disease virus (ENDV) (family Paramyxoviridae, genus Avulavirus). Laboratory-reared flies were allowed to feed on evaporated milk containing ENDV at a virus concentration of 10^8.3 egg infectious dose (EID)₅₀/0.1 ml or on poultry feces containing an ENDV titer of 10^5.8 EID₅₀/0.1 g. Flies exposed to either infectious food source for 24 hr became transiently infected with virus. Virus persisted predominantly in the mid- and hindgut, with relatively little virus isolated from the remainder of the fly body. Virus persisted similarly in both fly species that were fed evaporated milk containing ENDV, with a maximum ENDV titer of 10^5.98 EID₅₀/fly for the house fly and 10^4.78 EID₅₀/fly for the little house fly at 1 day postexposure; titers decreased on subsequent days to 10^2.38 EID₅₀/fly for house fly and ≥1 EID₅₀/fly for little house fly at 5 days postexposure. Both fly species acquired viral titers greater than the infective dose for a susceptible chicken (10^3.0 EID₅₀–10^4.0 EID₅₀). In addition, flies fed evaporated milk containing a high titer of ENDV maintained viral titers above the infective dose for up to 4 days postexposure to the infectious food source. Flies fed on infective feces retained a chicken infective dose for only one day. The decrease in viral titer over time was significantly explained by logistic regression for both fly species (P < 0.05). The slope of the regression line was not different for the two fly species (P < 0.05), indicating a similar rate of virus loss.

Persistencia del virus velogénico de la enfermedad de Newcastle en moscas domésticas (Musca domestica) y moscas domésticas pequeñas (Fannia canicularis) infectadas experimentalmente.

Se evaluó la capacidad de moscas domésticas (Musca domestica) y moscas domésticas pequeñas (Fannia canicularis) de infectarse y ser portadores de una cepa velogénica del virus de la enfermedad de Newcastle (familia Paramyxoviridae, género Avulavirus). Se permitió que moscas criadas en el laboratorio se alimentaran de leche evaporada contaminada con virus velogénico de la enfermedad de Newcastle a una concentración de 10^8.3 dosis infectiva 50 para embrión por cada 0.1 ml (DIE₅₀/0.1 ml) o en heces de aves que contenían virus velogénico de la enfermedad de Newcastle a una concentración de 10^5.8 DIE₅₀/0.1g. Las moscas expuestas por 24 horas a cualquiera de las dos fuentes de alimentación se infectaron transitoriamente con el virus. El virus persistió predominantemente en la porción media y distal del intestino, con relativamente poco virus aislado del resto del cuerpo de las moscas. El virus persistió de manera similar en las dos especies de moscas que fueron alimentadas con la leche evaporada que contenía el virus velogénico de la enfermedad de Newcastle, mostrando un día posterior a la infección un título máximo de 10^5.9 DIE₅₀/mosca para la mosca doméstica y de 10^4.7 DIE₅₀/mosca para la mosca doméstica pequeña. Los títulos decrecieron en los días subsecuentes hasta niveles de 10^2.3 DIE₅₀/mosca para la mosca doméstica y ≥1DIE₅₀/mosca para la mosca doméstica pequeña al quinto día posterior a la infección. Amba

Pigeon circovirus (PiCV) infection and young pigeon disease syndrome (YPDS), associated with high morbidity and mortality, have been recognized in young racing pigeons from large portions of Central Europe. There exist a number of data indicating that YPDS is a consequence of PiCV infection and subsequent immunosuppression. In order to prove PiCV to be one of the crucial factors of YPDS, an experimental infection with PiCV was performed under controlled conditions. Twenty-four domestic pigeons (Columba livia forma domestica) were divided into two groups with 12 pigeons each; an infection group and a control group. All birds were between their fourth to eighth week of life. Pigeons in the infection group were infected both intramuscularly and orally with PiCV purified from naturally infected birds, while pigeons in the control group received a placebo. To test a possible influence of the PiCV infection on the immune system, the animals in both groups were vaccinated simultaneously, on the same day, against PMV-1 (Lasovac plus®, IDT, Dessau-Tornau, Germany). Weekly virologic testing showed a viraemic period, and excretion of the infection virus, in pigeons in the infection group. Replication of PiCV could be proved on the basis of histologic findings of multiglobular inclusion bodies, mainly observed in macrophages of the bursa of Fabricius. A PiCV, genetically distinct from the experimental virus, was detected in the control group by polymerase chain reaction (PCR) testing, but any histologic findings comparable to the infection group were absent. None of the pigeons revealed clinical signs of illness, or hints that immunosuppression had occurred, regardless of their group. The absence of stressful conditions, considered as a trigger for the development of YPDS, may be responsible for the failure of disease reproduction in our infection model.

Infección experimental de palomas domésticas con circovirus de las palomas.

La infección por circovirus de las palomas y el síndrome de la paloma joven, ambas asociadas con alta morbilidad y mortalidad, se han detectado en palomas de carrera jóvenes en amplias áreas de Europa central. Existe información indicando que el síndrome de la paloma joven es una consecuencia de la infección con circovirus de las palomas que induce una subsecuente inmunosupresión. Con la finalidad de comprobar si la infección con circovirus de las palomas es uno de los factores cruciales para la aparición del síndrome de la paloma joven, se realizó una infección experimental bajo condiciones controladas. Se dividieron 24 palomas domésticas (Columba livia forma domestica) en dos grupos de 12; un grupo infectado y un grupo control. Todas las aves estaban entre su cuarta y octava semana de edad. Las palomas en el grupo infectado se infectaron por vía intramuscular y oral con circovirus de las palomas purificado a partir de aves infectadas naturalmente, mientras las aves en el grupo control recibieron un placebo. Para evaluar la posible influencia del circovirus de las palomas en el sistema inmune, ambos grupos se vacunaron de manera simultánea contra paramyxovirus de las palomas [(PMV-1) Lasovac plus, IDT, Dessau-Tornau, Germany]. La evaluación virológica semanal mostró un periodo virémico y la excreción del virus de desafío en palomas del grupo infectado. La replicación del circovirus de las palomas se comprobó mediante hallazgos histológicos de cuerpos de inclusión multiglobulares, principalmente en los macrófagos de la bolsa de Fabricio. Mediante la prueba de reacción en cadena por la polimerasa se detectó en el grupo control un circovirus de las palomas diferente al virus utilizado en el experimento, sin embargo, no se observaron hallazgos histológicos comparables con los observados en el grupo infectado. Independi

Recently, pathogenesis studies, using genetically distinct turkey-origin reoviruses (TRVs), revealed that poults infected with certain TRV isolates had moderate to severe bursal atrophy, suggesting virus-induced immune dysfunction. In order to characterize the effect of TRV infection on the turkey immune system, classical assays were undertaken to quantify the humoral and cell-mediated immune responses in small Beltsville and broad-breasted white poults infected with the TRV isolate NC/SEP-R44/03. A marked effect on the cutaneous basophil hypersensitivity response, and on the antibody response to Newcastle disease virus (NDV) exposure, was noted in commercial and specific pathogen free (SPF) poults inoculated with NC/SEP-R44/03 at three days of age. Moderate to severe bursal atrophy, similar to that noted previously in SPF poults, occurred in commercial poults inoculated at three days of age. This immune dysfunction and bursal atrophy was not present in commercial poults inoculated at three weeks of age.

Disfunción del sistema inmune inducida por reovirus de pavos, en pavitos comerciales y libres de patógenos específicos.

Estudios recientes de patogénesis usando reovirus genéticamente diferentes originados en pavos, revelaron que los pavitos infectados con cierto tipo de estos aislados presentaban atrofia de moderada a severa de la bolsa de Fabricio, sugiriendo que estos virus inducen disfunción del sistema inmune. Con el fin de caracterizar los efectos de estos reovirus sobre el sistema inmune de pavos, se llevaron a cabo pruebas clásicas para cuantificar las respuestas inmunes tanto humoral como mediada por células en pavos pequeños Beltsville y pavos blancos de doble pechuga infectados con el aislado de reovirus de pavo identificado como NC/SEP-R44/03. En pavitos comerciales y en libres de patógenos específicos inoculados a los tres días de edad, se observó un efecto marcado en la hipersensibilidad cutánea basofílica y en la respuesta de anticuerpos a la exposición con el virus de la enfermedad de New Castle. También se observó de moderada a severa atrofia de la bolsa de Fabricio en pavitos comerciales, similar a la observada previamente en pavitos libres de patógenos específicos inoculados a los tres días de edad. Esta disfunción del sistema inmune y atrofia de la bolsa de Fabricio no se observaron en pavitos comerciales inoculados a las tres semanas de edad.

Abbreviations: CBH = cutaneous basophile hypersensitivity; DPI = days postinoculation; EID = egg infectious dose; NDV = Newcastle disease virus; PEC = poult enteritis complex; PEMS = poult enteritis mortality syndrome; PHA-P = phytohemagglutinin-P; RSS = runting-stunting syndrome; SEPRL = Southeast Poultry Research Laboratory; S/P = sample to positive (ratio); SPF = specific pathogen free; TRV = turkey reovirus

In total, 83 avian pathogenic Escherichia coli (APEC) isolates from avian colibacillosis during a period from 2001 to 2006 in Japan were investigated for serogroups, typical virulence factors, antimicrobial susceptibility, and genetic relatedness. The most common serogroup was O78 (30.1%); 80.7% of isolates harbored the iss gene and 55.4% of isolates harbored the tsh gene. Antimicrobial resistance of the isolates was found for ampicillin (77.1%), oxytetracycline (75.9%), kanamycin (36.1%), fradiomycin (33.7%), trimethoprim (25.3%), enrofloxacin (21.7%), and florfenicol (6.0%). Although multiple antimicrobial-resistant phenotypes (three or more antimicrobials) accounted for 54.2% of isolates, no isolate exhibited resistance to all agents tested. The fluoroquinolone-resistant isolates had point mutations in GyrA (Ser83→Leu, Asp87→Asn) and ParC (Ser80→Ile, Glu84→Gly). Of 18 enrofloxacin-resistant E. coli isolates, nine isolates belonged to serotype O78. In PFGE analysis, eight of the nine enrofloxacin-resistant O78 isolates were classified into an identical cluster. This suggests that a specific genotype of fluoroquinolone-resistant O78 APEC may be widely distributed in Japan.

Susceptibilidad antimicrobiana, serogrupos y caracterización molecular de aislamientos de Escherichia coli patógena en Japón.

Un total de 83 aislamientos de Escherichia coli patógena provenientes de casos de colibacilosis aviar en Japón durante los años 2001 al 2006, fueron investigados para determinar su serogrupo, la presencia de factores típicos de virulencia, su susceptibilidad antimicrobiana y su relación genética. El serogrupo mas común fue el O78 (30.1%), el 80.7% de los aislamientos contenían el gen iss y el 54.4% de los aislamientos contenían el gen tsh. Entre los aislamientos se observó resistencia antibacteriana contra la ampicilina (77.1%), oxitetraciclina (75.9%), kanamicina (36.1%), fradiomicina (33.7%), trimetropina (25.3%), enrofloxacina (21.7%) y florfenicol (6%). Aun cuando los fenotipos de resistencia múltiple (tres o mas antibióticos) representaban el 54.2% de los aislamientos, ningún aislamiento mostró resistencia a todos los agentes antimicrobianos evaluados. Los aislamientos resistentes a la fluoroquinolona presentaron mutaciones puntuales en los genes GyrA (Ser83- Leu y Asp87- Asn), así como en el gen ParC (Ser80-Ile, y Glu84-Gly). De 18 aislamientos de E. coli resistentes a la enrofloxacina, nueve aislamientos pertenecían al serotipo O78. En el análisis mediante electroforesis de campo pulsado, ocho de los nueve aislamientos O78 resistentes a enrofloxacina se clasificaron en el mismo grupo. Esto sugiere que un genotipo específico de E. coli patógena del serogrupo O78 resistente a las fluoroquinolonas puede estar ampliamente distribuido en Japón.

Abbreviations: ABPC = ampicillin; APEC = avian pathogenic Escherichia coli; ERFX = enrofloxacin; FFC = florfenicol; FM = fradiomycin; KM = kanamycin; MIC = minimum inhibitory concentration; NCCLS = National Committee for Clinical Laboratory Standards; OTC = oxytetracycline; PCR = polymerase chain reaction; PFGE = pulsed-field gel electrophoresis; QRDR = quinolone-resistant determining region; TMP = trimethoprim; UT = untypeable

Oligodeoxynucleotides (ODN) containing cytosine-phosphodiester-guanine (CpG-ODN) motifs have been shown to stimulate the innate immune system against a variety of bacterial and protozoan infections in a variety of vertebrate species. The objective of this study was to investigate the immunostimulatory effect of CpG-ODN in neonatal broilers against Salmonella Typhimurium septicemia. Day-old broiler chicks, or embryonated eggs that had been incubated for 18 days, received 50 µg of CpG-ODN, 50 µg of non-CpG-ODN, or saline. Four days after exposure to CpG-ODN or day 2 posthatch, 1 × 10⁶ or 1 × 10⁷ colony-forming units (cfu) of a virulent isolate of Salmonella Typhimurium was inoculated by the subcutaneous route in the neck. Clinical signs, pathology, bacterial isolations from the air sacs, and mortality were observed for 10 days following challenge with Salmonella Typhimurium. The survival rate of birds in groups receiving either non-CpG-ODN or saline following Salmonella Typhimurium infection was 40%–45%. In contrast, birds receiving CpG-ODN had significantly higher survival rate of 80%–85% (P < 0.0001). Bacterial loads and pathology were low in groups treated with CpG-ODN compared to the groups receiving saline or non-CpG-ODN. Colony-forming units of Salmonella Typhimurium in the peripheral blood were significantly lower in birds treated with CpG-ODN compared to the group that received saline. This is the first time that CpG-ODN has been demonstrated to have an immunoprotective effect against an intracellular bacterial infection in neonatal broiler chickens following in ovo delivery.

Protección de pollos de engorde recién nacidos contra septicemia causada por Salmonella Typhimurium mediante ADN con motivos CpG.

Se ha demostrado que los oligodeoxinucleótidos que contienen motivos CpG (por sus siglas en Inglés CpG-ODN), estimulan el sistema inmune innato contra una variedad de infecciones bacterianas y de protozoarios en varias especies de vertebrados. El objetivo de este estudio fue investigar el efecto inmunoestimulatorio de CpG-ODN contra Salmonella Typhimurium en pollos de engorde recién nacidos. Pollitos de engorde de un día de edad o huevos fértiles en el día 18 de la etapa embrionaria, recibieron 50 µg de CpG-ODN, 50 µg de oligodeoxinucleótidos sin motivos CpG (No-CpG-ODN) o solución salina. Cuatro días después de la exposición a los CpG-ODN o dos días después del nacimiento, las aves se inocularon subcutáneamente en el cuello con 1 × 10⁶ o 1 × 10⁷ unidades formadoras de colonias de un aislamiento virulento de Salmonella Typhimurium. Posterior al desafío, las aves se observaron durante 10 días para la aparición de signos clínicos, alteraciones patológicas, aislamiento bacteriano de los sacos aéreos y mortalidad. La tasa de supervivencia posterior a la infección con Salmonella Typhimurium en los grupos que recibieron No-CpG-ODN o solución salina fue de un 40 a 45%. En contraste, las aves que recibieron CpG-ODN mostraron una tasa de supervivencia significativamente mas alta de 80 a 85% (P < 0.0001). En comparación con los grupos que recibieron No-CpG-ODN o solución salina, las cargas bacterianas y la patología de las aves que recibieron CpG-ODN fueron bajas. Las unidades formadoras de colonia de Salmonella Typhimurium en sangre periférica fueron significativamente menores en las aves tratadas con CpG-ODN que en las aves tratadas con solución salina. Esta es la primera vez que se demuestra que los CpG-ODN administrados in ovo tienen un efecto c

The efficacy of penicillin G potassium (Pot-Pen) administered via drinking water to manage necrotic enteritis (NE) was investigated in a Clostridium perfringens (CP) challenge study using 1600 broiler chickens assigned to one of four treatment groups: nonchallenged, nonmedicated; challenged, nonmedicated; challenged, Pot-Pen 0.2 g/L; challenged, Pot-Pen 0.4 g/L. Overall mortality due to NE was significantly reduced among Pot-Pen–treated pens; mortality due to other causes did not differ among the treatment groups. Among all birds, growth performance parameters were significantly improved among Pot-Pen–treated pens. When considering birds randomly sacrificed 4 days post-Pot-Pen initiation, mean NE lesion scores were greatest among the challenged, nonmedicated pens; only one of 80 randomly sacrificed birds treated with Pot-Pen had NE lesions. Among the nonmedicated control pens, body weight (BW) was significantly greater among birds that did not have NE-associated lesions. When sacrificed birds were stratified by NE lesion score, there were no significant differences in BW among the treatment groups. Results of this study suggest that CP-associated subclinical disease can significantly reduce broiler performance. Furthermore, the positive effects of treatment with Pot-Pen appeared to be associated with the prevention and/or treatment of NE-specific lesions.

El papel de la penicilina G potásica en el manejo del Clostridium perfringens en pollos de engorde.

Mediante un estudio de desafío de Clostridium perfringens, se investigó la eficacia de la penicilina G potásica administrada en el agua de bebida para el manejo de la enteritis necrótica. Se utilizaron 1600 pollos de engorde asignados a cuatro tratamientos: 1) no desafiados / no medicados; 2) desafiados / no medicados; 3) desafiados / medicados con penicilina G 0.2 g/L; 4) desafiados / medicados con penicilina G 0.4 g/L. En general, la mortalidad debido a enteritis necrótica se redujo en los corrales tratados con penicilina G, mientras la mortalidad por otras causas no difirió entre tratamientos. Los parámetros productivos se incrementaron significativamente en los grupos tratados. Analizando aves sacrificadas aleatoriamente 4 días posteriores a la administración de la penicilina G, el promedio del registro de lesiones entre las aves desafiadas / no medicadas fue el más alto; solo una de 80 aves tratadas con penicilina G mostró lesiones de enteritis necrótica. Entre los corrales no medicados, el peso corporal fue mayor en las aves que no mostraron lesiones asociadas con enteritis necrótica. Una vez sacrificadas, las aves se clasificaron en base al registro de lesiones. No se observaron diferencias significativas en el peso corporal entre los tratamientos. Los resultados de este estudio sugieren que la enfermedad subclínica asociada con Clostridium perfringens puede reducir significativamente el rendimiento productivo de los pollos de engorde. Además, los efectos positivos del tratamiento con penicilina G están aparentemente asociados con la prevención y/o tratamiento de lesiones específicas de enteritis necrótica.

Abbreviations: BW = body weight; CP = Clostridium perfringens; FCR = feed conversion ratio; NE = necrotic enteritis; Pot-Pen = penicillin G potassium

Primary chicken embryo fibroblasts (CEF) from special specific pathogen-free chicken lines are used for detection of contamination of adult or embryonic tissues, meconium, or tissue culture fluids with avian leukosis viruses (ALV). The suitability and efficiency of such tests depend on the susceptibility of CEF to the various subgroups of exogenous as well as endogenous ALV. The ideal CEF for such tests should be not only susceptible to all retroviruses, but also free of endogenous viruses so that such tests are immune to any interference that may occur between the endogenous and the tested (exogenous) viruses. CEF and/or chickens free of endogenous viruses are also desirable for gene transfer studies using retroviral vectors, such as RNA interference (RNAi) experiments and transgenic work. The absence of ev genes in CEF or chickens can empower clean detection of successful RNAi construct delivery or gene transfer. CEF free of ev genes are also essential reagents routinely used in growing and detecting unknown retroviruses in varied viral assays. This report documents the development of a new line of chickens, 0.TVB*S1, that is free of endogenous viruses and susceptible to all subgroups of ALV identified in chickens.

Desarrollo de una línea de aves libres de virus endógenos, susceptible a todos los subgrupos del virus de leucosis aviar.

Los cultivos primarios de fibroblastos de embrión de pollo provenientes de líneas de aves libres de patógenos específicos son utilizados para detectar contaminaciones con el virus de leucosis aviar en tejidos embrionarios, meconio o cultivos celulares. La factibilidad y eficacia de este tipo de pruebas depende de la susceptibilidad de los fibroblastos de embrión pollo a los subgrupos de virus exógenos, así como a los virus endógenos. Los fibroblastos de embrión de pollo ideales para este tipo de pruebas deben ser no solo susceptibles a todos los retrovirus, sino también libres de virus endógenos de manera que las pruebas sean inmunes a cualquier interferencia que pueda ocurrir entre los virus endógenos y los virus exógenos para los que se realiza la prueba. Fibroblastos de embrión pollo y/o aves libres de virus endógenos también son deseables para estudios de transferencia genética utilizando vectores retrovirales, tales como experimentos con ARN de interferencia o experimentos transgénicos. La ausencia de genes de virus endógenos en aves o en fibroblastos de embrión de pollo puede mejorar la detección de la transferencia exitosa de moléculas de ARN de interferencia o de genes. Los fibroblastos de embrión pollo libres de genes de virus endógenos son reactivos esenciales utilizados rutinariamente en varios ensayos para la detección de retrovirus desconocidos. Este trabajo documenta el desarrollo de una nueva línea de aves designada 0.TVB*S1, que es libre de virus endógenos y susceptible a todos los subgrupos de virus de leucosis aviar identificados en pollos.

Abbreviations: ADOL = Avian Disease and Oncology Laboratory; ALV = avian leukosis virus; ALV-A = subgroup A of ALV; ALV-B = subgroup B of ALV; ALV-C = subgroup C of ALV; ALV-D = subgroup D of ALV; ALV-E = subgroup E of ALV; ALV-J = subgroup J of ALV; CEF = chicken embryo fibroblasts; ELISA = enzyme-linked immunosorbent assay; ev = endogenous virus; FC = flow cytometric; PCR = polymerase chain reaction; TVA = tumor virus A locus; TVB = tumor virus B locus; TVC = tumor virus C locus; TVJ = tumor virus J locus; RAV = Rous associated viruses; RBC = red blood cell

Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) is an emerging respiratory pathogen of poultry in North America that is causing millions of dollars in economic losses to the poultry industry. Ornithobacterium rhinotracheale is associated with airsacculitis, pleuritis, pneumonia, and consolidation of lungs. Little is known about the molecular mechanisms of infection. In this study, the mechanism of iron acquisition by O. rhinotracheale was explored. O. rhinotracheale strains grown under iron deprivation in media containing 200 µM 2,2′-dipyridyl did not secrete siderophores as measured by the chrome azurol S (CAS) agar and CAS solution assays. Filter disks impregnated with various protein-bound iron compounds and inorganic iron salts of Fe(III) and Fe(II) placed on iron-restricted agar inoculated with a lawn of O. rhinotracheale supported growth from sheep and porcine hemoglobins, ovotransferrin, Fe(III), and Fe(II), but they did not support growth from bovine transferrin, bovine apo-transferrin, bovine lactoferrin, and hemin. However, both bovine hemoglobin and transferrin supported growth of O. rhinotracheale serotype C. Four immunoreactive proteins involved in iron acquisition were identified in an O. rhinotracheale membrane extract by using mass spectrometry. Furthermore, O. rhinotracheale field strains showed differential sensitivity to 2,2′-dipyridyl. Of the 72 field strains tested, 22 strains were resistant to the iron chelator at concentrations of 50 µM and 100 µM, suggesting this attribute may be related to disease-producing potential of these strains. This is the first report on the identification of the iron acquisition mechanism of O. rhinotracheale.

Adquisición de hierro por parte del Ornithobacterium rhinotracheale.

El Ornithobacterium rhinotracheale es un patógeno respiratorio emergente en las aves domésticas de Norte América que está causando millones de dólares en pérdidas a la industria avícola. El Ornithobacterium rhinotracheale se asocia con aerosaculitis, pleuritis, neumonía y consolidación en los pulmones. Poco se conoce sobre los mecanismos moleculares de infección. En este estudio se exploraron los mecanismos de adquisición de hierro por parte del Ornithobacterium rhinotracheale. Según se determinó mediante pruebas de agar de cromo azurol-S y de solución de cromo azurol-S, las cepas de Ornithobacterium rhinotracheale cultivadas con deprivación de hierro en un medio con 200 µm de 2,2′-dipiridil, no secretaron sideróforos. Discos impregnados con diferentes compuestos protéicos unidos a hierro y sales inorgánicas de hierro Fe (III) y Fe (II) colocadas en agar deprivado de hierro inoculado con una capa de O. rhinotracheale, permitieron crecimiento a partir de hemoglobinas de oveja y cerdo, de ovotransferrinas, Fe (III) y Fe (II), pero no a partir de transferrina bovina, apo-transferrina bovina, lactotransferrina bovina y hemina, Fe (III) y Fe (II). Sin embargo, tanto la hemoglobina como la transferrina bovina permitieron el crecimiento del O. rhinotracheale tipo C. En extractos de membrana de O. rhinotracheale, se detectaron cuatro proteínas inmunoreactivas relacionadas con el proceso de adquisición de hierro mediante espectrofotometría de masa. Además, las cepas de campo de O. rhinotracheale mostraron diferente sensibilidad al 2,2′-dip

Seven psittacine birds and a toucan (Ramphastos toco) were diagnosed as infected with Coxiella-like bacteria, based on polymerase chain reaction and bacterial 16S rRNA gene sequence obtained from each bird's liver tissue. Most of the birds exhibited lethargy and weakness for several days prior to death. Gross lesions included mild to moderate emaciation and severely enlarged and mottled pale livers and spleens. Microscopically, there was multifocal necrosis of hepatocytes with infiltration of a mixed population of inflammatory cells, including lymphocytes, heterophils, plasma cells, and macrophages randomly scattered throughout in most birds. In several birds within the macrophages there were vacuoles containing basophilic small cocco-bacilli organisms measuring about 0.5–1 µm. The spleens had increased numbers of mononuclear phagocytic system cells, some of which had vacuoles that contained similar organisms, as observed in the liver. There was inflammation in the epicardium and endocardium, interstitium of the lungs, kidney, adrenal and thyroid glands, lamina propria of the intestine, and in occasional birds in the brain, bursa of Fabricius, and bone marrow associated with similar organisms in the macrophages. Transmission electron microscopy of the liver and lungs in most birds and in the thyroid glands of one bird revealed pleomorphic round to elongated bacteria measuring about 0.45 µm in diameter and more than 1.0 µm in length. Most of these organisms contained a peripheral zone of loosely arranged electron dense material that was located immediately beneath a trilaminar membrane. Occasional organisms contained nucleoids. This is the first documentation of disease presumptively associated with Coxiella-like bacteria in birds.

Infección con bacterias parecidas a Coxiella en psitácidos y un tucán.

Se diagnosticó la infección con una bacteria parecida a Coxiella en siete aves psitácidas y en un tucán (Ramphastos toco), basándose en una prueba de reacción en cadena por la polimerasa y la secuenciación del gen 16S rRNA obtenido de tejido hepático de cada una de las aves. La mayoría de las aves mostraron letargia y debilidad por varios días antes de la muerte. Las lesiones macroscópicas incluyeron emaciación de leve a moderada, así como hígados y bazos pálidos, moteados y severamente aumentados de tamaño. Microscópicamente, se observó necrosis multifocal de los hepatocitos con infiltración de una mezcla de células inflamatorias incluyendo linfocitos, heterófilos, células plasmáticas y macrófagos distribuidos aleatoriamente en la mayoría de las aves. En varias de las aves, se observaron dentro de los macrófagos hepáticos vacuolas con pequeños organismos basofílicos del tipo cocobacilos que medían entre 0.5 y 1 µm. Los bazos tenían un número aumentado de células del sistema fagocítico, algunas de las cuales mostraban vacuolas que contenían organismos similares a los observados en el hígado. Se observó inflamación asociada a organismos similares en los macrófagos, en el epicardio y endocardio, en el intersticio de los pulmones, riñones, glándulas adrenal y tiroides, en la lámina propia del intestino y en algunas de las aves en el cerebro, bolsa de Fabricio y medula ósea. La microscopía electrónica del hígado y los pulmones en la mayoría de las aves y de la glándula tiroides de un ave, reveló la presencia de bacterias de redondas a alargadas de aproximadamente 0.45 µm de diámetro y más de 1 µm de longitud. La mayoría de estos organismos contenían una zona periférica de material denso localizado inmediatamente por debajo de la membrana trilaminar. Algunos organismos contenían nucléolos. Este es el primer reporte de enfermedad presumiblemente asociada con bacterias p

Endogenous avian leukosis virus (ALVE) and the ALVE receptor (TVB*S1) status of six commercial chicken lines supplying specific-pathogen-free eggs were analyzed. All commercial chicken lines are certified free of the avian leukosis virus (ALV) by screening for expression of the p27 protein using the standard enzyme-linked immunosorbent assay. The commercial chicken lines A, E, and F contained replication competent ALVE inserts. Line A was fixed for ALVE21, and lines E and F were segregating for ALVE10. In addition, ALVE1 was detected in all the chicken lines. Chicken lines B, D, and F were essentially fixed for the TVB*S1 allele that confers susceptibility to ALVE, whereas lines A, C, B, and E were resistant, containing either the TVB*S3 or TVB*R alleles. The results show that lines selected to be ALV p27 negative give rise to two different genotypes. One genotype lacks the TVB*S1 receptor for ALVE. Chicken lines with the TVB*S1 negative genotype can retain replication competent endogenous virus inserts such as ALVE2, 10, or 21 and still display the p27 negative phenotype. These replication competent ALVE viruses are phenotypically p27 negative in the absence of the TVB*S1 receptor because their chromosomal integration sites restrict transcription and subsequent production of the p27 protein and virus particles to levels below the detection limit. If the TVB*S1 receptor is present, the limited production of ALVE virus particles reinfects and integrates into more productive chromosomal locations in the cell. Increased production of infective virus particles and detectable levels of p27 follow this reinfection and integration into more active regions of the cells genome. The other genotype observed in the commercial lines retains the ALVE receptor (TVB*S1) but either lacks replication competent inserts or expresses the envelope encoded protein from defective inserts such as ALVE3 or ALVE6. In this phenotype, the env-coded glycoprotein encoded by the defective inserts binds to the TVB*S1 receptor and blocks the reinfection of the replication competent ALVE virus. This receptor interference stops reinfection and subsequent production of detectable virus particles and the p27 protein. Mixtures of different p27 negative phenotypes can result in the p27 positive phenotype and ALVE virus production. For example, mixtures of ALVE receptor positive (TVB*S1) but ALVE negative (p27 negative and envelope negative) chick embryo fibroblasts (CEFs) with fibroblasts that are receptor negative but ALVE positive could generate cells expressing high levels of p27 and ALVE virus. In this situation, the undetectable levels of ALVE virus from the receptor negative CEFs would infect and integrate into the receptor positive CEFs and produce detectable levels of ALVE virus. The implications of these findings for vaccine manufacturers and regulatory agencies are discussed.

Estudio sobre la presencia de virus endógenos y receptores para el virus de leucosis aviar (TVB*) en parvadas comerciales productoras de huevos libres de patógenos específicos.

Se analizó la presencia de virus endógenos de leucosis aviar y de receptores para virus endógenos de leucosis aviar (TVB*S1) en seis líneas comerciales productoras de huevos libres de patógenos específicos. Todas las líneas comerciales son certificadas como libres del virus de leucosis aviar utilizando la prueba estándar de inmunoensayo asociado a enzimas para la detección de la expresión de la proteína p27. Las líneas comerciales A, E y F contenían insertos de virus endógenos de leucosis aviar con capacidad de replicación. La línea A contenía el virus endógeno de leucosis aviar 21 de manera constitutiva y las líneas E y F segregaban el virus endógeno de leucosis aviar 10. Adicionalmente, el virus endógeno de leucosis aviar 1 se detectó en todas las lín

Mycoplasmas are pathogens of different avian species, and they are able to be vertically transmitted. Even detected, Mycoplasma prevalence in raptor eggs is very low. In contrast to poultry, raptor eggs submitted for investigations are usually incubated. To investigate the influence of incubation length on the recovery of mycoplasmas from eggs, infertile specific-pathogen-free chicken eggs and embryos were infected with Mycoplasma lipofaciens (strain ML64), which had previously been isolated from an egg of a northern goshawk (Accipiter gentilis), in two different dosages. The eggs were investigated up to 12 days after infection (infertile eggs) or embryonic death. Mycoplasmas were recovered over the entire period after embryonic death by isolation. It was possible to re-isolate M. lipofaciens (strain ML64) from infertile eggs infected with 10⁶ colony-forming units (CFUs) up to 12 days, but only up to 7 days if infected with 10² CFUs, which may be closer to the situation after natural infection. This study demonstrates that incubation of infertile eggs does have an influence on the recovery rate of mycoplasmas. This influence must be considered if interpreting results of Mycoplasma investigations in eggs of nonpoultry species. Additionally, it is recommended to use dead in shell embryos rather than infertile eggs for Mycoplasma detection.

Efecto del tiempo de incubación en el aislamiento de Mycoplasma lipofaciens (cepa ML64) a partir de huevos infértiles incubados y embriones de pollo muertos en el cascarón.

Los micoplasmas son patógenos de diferentes especies aviares que pueden ser transmitidos verticalmente. Aun cuando se detectan, la prevalencia de micoplasmas en huevos de aves de presa es muy baja. Contrario a lo que ocurre en las aves domésticas, usualmente los huevos de aves de presa enviados para análisis han sido incubados. Para investigar la influencia de la duración de la incubación de los huevos sobre el aislamiento de Mycoplasma, se infectaron huevos infértiles y embriones de aves libres de patógenos específicos con dos dosis distintas de la cepa ML64 de Mycoplasma lipofaciens previamente aislada de un huevo de un gavilán azor (Accipiter gentilis). Los huevos infértiles y los embriones muertos se investigaron hasta 12 días después de la infección. Luego de la muerte embrionaria, se aislaron micoplasmas durante todo el período de muestreo. Fue posible reaislar M. lipofaciens (cepa ML64) de huevos infértiles infectados con 10⁶ unidades formadoras de colonias hasta por 12 días, mientras que en huevos infectados con 10² unidades formadoras de colonias solo fue posible por 7 días, siendo este escenario más parecido a la situación después de una infección natural. Este estudio demuestra que la incubación de huevos infértiles influencia la tasa de aislamiento de micoplasmas. Esta influencia debe considerarse en la interpretación de resultados de investigaciones de Mycoplasma en huevos de aves no domésticas. Adicionalmente, se recomienda la utilización de embriones de pollo muertos en el cascarón en lugar de huevos infértiles para la detección de Mycoplasma.

Abbreviations: CFU = colony-forming unit; PCR = polymerase chain reaction; p.i. = postinoculation; SPF = specific-pathogen-free

Listeria monocytogenes is a ubiquitous, environmental pathogen that has contaminated poultry ready-to-eat products resulting in large-scale recalls. Research is needed to determine the source of product and processing plant contamination with L. monocytogenes. The purpose of this study was to compare the oral and oculonasal routes of infection on the pathogenicity of L. monocytogenes in turkey poults under different housing conditions. One-day-old turkey poults were challenged by either route with the Scott A strain of L. monocytogenes and placed either in paper-lined battery-brooder cages for 1 wk or in floor pens on fresh pine-shaving litter. On day 7, birds challenged in battery cages were transferred to floor pens. Challenge by the oculonasal route resulted in higher mortality (P  =  0.05) and lower body weights (P < 0.0001) compared with both nonchallenged controls and those challenged by the oral route. Birds contained in battery cages for 1 wk had higher mortality (P  =  0.002) and higher body weights (P < 0.0001) compared with floor-pen–reared birds. Using direct plating, the challenge strain was isolated from the gall bladder, brain, and knee joint of only one dead poult challenged by the oculonasal route. These results suggest that day-old turkey poults may be more susceptible to an oculonasal challenge with L. monocytogenes than to an oral challenge and that containment in battery cages for the first week increased contact exposure to the challenge.

Patogenicidad de Listeria monocytogenes Scott A luego del desafío oral y oculonasal de pavitos de un día de edad.

La Listeria monocytogenes es un patógeno ambiental ubicuo que ha contaminado productos avícolas listos para consumir resultando en retiros masivos del mercado. Se requiere investigación para determinar el origen de la contaminación con L. monocytogenes de productos y de la planta de procesamiento. El propósito de este estudio fue comparar el efecto de las rutas de infección oral y óculonasal en la patogenicidad de L. monocytogenes en pavos jóvenes bajo diferentes condiciones de crianza. Se desafiaron pavitos de un día de edad con L. monocytogenes por alguna de las dos rutas y se colocaron en jaulas de crianza con papel en el piso por una semana o se colocaron en corrales con cama de viruta de pino. Al día siete, las aves desafiadas en las jaulas se transfirieron a los corrales en piso. El desafío por la vía óculonasal resultó en mayor mortalidad (P  =  0.05) y en pesos corporales mas bajos (P < 0.0001), en comparación con los controles no desafiados y las aves desafiadas por la vía oral. Las aves mantenidas en las jaulas por una semana presentaron una mayor mortalidad (P  =  0.002) y mayor peso corporal (P < 0.0001) que las aves criadas en el piso. Utilizando siembra directa, se aisló la cepa de desafío de la vesícula biliar, cerebro y articulación de la rodilla de sólo una de las aves muertas desafiada por la vía óculonasal. Estos resultados sugieren que los pavitos de un día de edad pueden ser más susceptibles a un desafío óculonasal con L. monocytogenes que a un desafío oral y que el confinamiento en jaulas durante la primera semana incrementó la exposición por contacto al desafío.

Abbreviations: Baso = basophils; CFU = colony forming units; EDTA = ethylenediaminetetraacetic acid; Eos = eosinophils; FAC = ferric ammonium citrate; Het = heterophils; Lym = lymphocytes; Mono = monocytes; plt = platelets; TPB = tryptose phosphate bro

Budgerigar fledgling disease is an acute viral infectious disease caused by avian polyomavirus (APV). In this study, 34 liver tissue samples of young, dead budgerigar with typical symptoms were collected in 2004. All the samples had positive polymerase chain reaction (PCR) test based on the VP1 specific primers. VP1 genes of these samples were sequenced and had high similarities to each other (99%–100%). A strain (HBYM02) was isolated and sequenced. As shown in the phylogenetic tree, there are two branches. One branch was composed by strains isolated from Passeriformes, and the other was composed only by one strain isolated from Falconiformes. The genome similarities between our isolate and other reported isolates were very high (>99%), and the evolution distances in the phylogenetic tree were very short (<0.005), which suggests that APV in China has the same genotype as those in other regions. The results will be useful for the diagnoses of, and vaccine development for, APV.

Abbreviations: APV = avian polyomavirus; BFD = budgerigar fledgling disease; CEF = chicken embryo fibroblast; ORF = open reading frame; PCR = polymerase chain reaction; VP = viral protein

Caracterización molecular de un poliomavirus aviar aislado de pericos Australianos en China.

La enfermedad de polluelos de perico es una enfermedad viral aguda causada por un poliomavirus aviar. En el presente estudio, 34 muestras de tejido hepático provenientes de pericos Australianos jóvenes muertos con signos típicos de la enfermedad se colectaron durante el año 2004. Todas las muestras resultaron positivas a la prueba de reacción en cadena por la polimerasa basada en iniciadores específicos para la proteína viral 1. Se secuenciaron los genes de la proteína viral 1 de estas muestras mostrando altas similitudes entre sí (99 a 100 %). Se aisló y secuenció una cepa identificada como HBYMO2. Como se muestra en el árbol filogenético, existen dos ramas. Una rama compuesta por cepas aisladas de paseriformes y la otra compuesta por una cepa aislada de falconiformes. Las similitudes genéticas entre nuestro aislamiento y otros aislamientos reportados fue muy alta (>99%) y las distancias evolutivas en el árbol filogenético muy corta (<0.005), lo que sugiere que los poliomavirus de China tienen el mismo genotipo que los de otras regiones. Estos resultados serán útiles para el diagnóstico y desarrollo de vacunas contra poliomavirus aviar.

The mean infectious doses of selected avian influenza virus (AIV) isolates, determined in domestic poultry under experimental conditions, were shown to be both host-dependent and virus strain–dependent and could be considered one measure of the infectivity and adaptation to a specific host. As such, the mean infectious dose could serve as a quantitative predictor for which strains of AIV, given the right conditions, would be more likely transmitted to and maintained in a given species or subsequently cause an AI outbreak in the given species. The intranasal (IN) mean bird infectious doses (BID₅₀) were determined for 11 high-pathogenicity AIV (HPAIV) isolates of turkey and chicken origin for white leghorn (WL) chickens, and for low-pathogenicity AIV (LPAIV) isolates of chicken (n  =  1) and wild mallards (n  =  2) for turkeys, and WL and white Plymouth rock (WPR) chickens, domestic ducks and geese, and Japanese quail. The BID₅₀ for HPAIV isolates for WL chickens ranged from 10^1.2 to 10^4.7 mean embryo infectious dose (EID₅₀) (median  =  10^2.9). For chicken-origin HPAIV isolates, the BID₅₀ in WL chickens ranged from 10^1.2 to 10^3.0 EID₅₀ (median  =  10^2.6), whereas for HPAIV isolates of turkey origin, the BID₅₀ in WL chickens was higher, ranging from 10^2.8 to 10^4.7 EID₅₀ (median  =  10^3.9). The BID₅₀ of 10^4.7 was for a turkey-origin HPAIV virus that was not transmitted to chickens on the same farm, suggesting that, under the specific conditions present on that farm, there was insufficient infectivity, adaptation, or exposure to that virus population for sustained chicken transmission. Although the upper BID₅₀ limit for predicting infectivity and sustainable transmissibility for a specific species is unknown, a BID₅₀ < 10^4.7 was suggestive of such transmissibility. For the LPAIVs, there was a trend for domestic ducks and geese and Japanese quail to have the greatest susceptible and for WL chickens to be the most resistant, but turkeys were susceptible to two LPAIV tested when used at moderate challenge doses. This suggests domestic ducks and geese, turkeys, and Japanese quail could serve as bridging species for LPAIVs from wild waterfowl to chickens and other gallinaceous poultry. These data do provide support for the commonly held and intuitive belief that mixing of poultry species during rearing and in outdoor production systems is a major risk factor for interspecies transmission of AIVs and for the emergence of new AIV strains capable of causing AI outbreaks because these situations present a more diverse host population to circumvent the natural host dependency or host range of circulating viruses.

Utilización de la dosis infecciosa media de virus de influenza aviar de alta o baja patogenicidad originados de aves domésticas o patos silvestres como una medida de infectividad y adaptación a las aves domésticas.

Las dosis infecciosas medias de aislamientos seleccionados del virus de influenza aviar determinadas bajo condiciones experimentales en aves domésticas, demostraron ser dependientes del huésped y de la cepa del virus, pudiendo considerarse como una medida de la infectividad y adaptación a un huésped específico. Como tal, las dosis infectivas medias podrían servir para predecir cuantitativamente cuáles cepas del virus de influenza aviar, dadas las condiciones adecuadas, sería más propensa a ser transmitida y mantenida en una especie determinada o subsecuentemente causar un brote de influenza aviar es esa especie. En aves leghorn blancas, se calculó la dosis infecciosa media 50 por ave (por sus siglas en Inglés BID₅₀) de 11 aislamientos de influenza aviar de alta patogenicidad originados en pollos y pavos p

The aim of this study was to quantify transmission of infectious bronchitis virus (IBV) H120 vaccine strain among broilers, and to assess whether birds that have been exposed to vaccine strain-shedding birds were protected against clinical signs after infection with a virulent strain of the same serotype. A transmission experiment and a replicate were carried out, each with six groups of commercial broilers. At day of hatch (n  =  30) or at 15 days of age (n  =  20), half of each group was inoculated with either IBV H120 vaccine (H120 group), virulent IBV M41 (M41 group), or were mock-infected, thereby contact-exposing the other half of each group. Nasal discharge was recorded, and antibody response and virus shedding were measured. To measure clinical protection, four weeks after inoculation all birds, in all groups, were challenged with IBV M41. The reproduction ratio (R; the average number of contact infections caused by one infectious bird) was determined to quantify virus transmission. All contact-exposed birds, except for one in an H120 group, became infected with either IBV H120 or IBV M41. Almost all birds contact-infected with IBV H120 or IBV M41 were subsequently protected against clinical signs after challenge with IBV M41. The lower limits of the 95% confidence interval (CI) of the R of IBV H120 vaccine, and of IBV M41, were significantly <1. For both IBV H120 and IBV M41, the 95% CI was [2.1–∞] following inoculation at day of hatch and [1.8–∞] after inoculation at 15 days of age. This finding demonstrates that IBV H120 vaccine is able to spread extensively among broilers. This implies that this vaccine strain might be able to become endemically present in the poultry population. It also implies that, even if not all birds received vaccine during spray application, due to the ability of the vaccine to spread in the flock, they will most likely be protected against clinical signs after a subsequent field virus infection.

Transmisibilidad de la cepa vacunal H120 de bronquitis infecciosa entre pollos de engorde bajo condiciones experimentales.

El objetivo del presente trabajo fue cuantificar la transmisión de la cepa vacunal H120 de bronquitis infecciosa entre pollos de engorde y evaluar si las aves que han sido expuestas a aves diseminando la cepa vacunal del virus, estaban protegidas contra los signos clínicos luego de un desafío con una cepa virulenta perteneciente al mismo serotipo. Se realizó un experimento de transmisión viral y una réplica, cada uno con seis grupos de pollos de engorde comerciales. Al día de edad (n  =  30) o a los 15 días de edad (n  =  20) la mitad de cada grupo se inoculó con la vacuna H120 (grupo H120), con virus virulento de bronquitis infecciosa cepa M41 (grupo M41) o no fueron infectadas, en consecuencia exponiendo por contacto a la otra mitad de cada grupo. Se llevó registro de las descargas nasales y se midió la respuesta de anticuerpos y la diseminación del virus. Cuatro semanas después de la inoculación, todas las aves se desafiaron con la cepa virulenta de bronquitis infecciosa M41 para evaluar la protección clínica. Cuantificando la transmisión del virus, se determinó la tasa de reproducción (promedio de infecciones por contacto causadas por un ave infecciosa). Todas las aves expuestas por contacto, excepto una en el grupo H120, se infectaron con el virus H120 o M41. Casi todas las aves expuestas por contacto con el virus H120 o con M41mostraron protección contra signos clínicos luego de un desafío con la cepa M41 de bronquitis infecciosa. Los limites inferiores de los intervalos de confianza 95% de la tasa de reproducción de la vacuna H120 y del virus M41 fueron significantes <1. Para ambos virus el intervalo de confianza 95% fue [2.1–∞] luego de la inoculación al día de edad y [1.8–∞] después de la inoculación a los 15 días de edad. Este hallazgo demuestra que la vacuna de bronquitis i

Since 1997, severe outbreaks of Newcastle disease (ND) in geese in many regions throughout China have resulted in high morbidity and mortality, and great economic loss to farmers; however, no licensed, specific vaccine is yet available for this disease in China. In this study, goslings were immunized with different combinations and dosages of several commercial ND vaccines including La Sota vaccine, Mukteswar vaccine, recombinant live vaccine against avian influenza (AI) and ND (rL-H5 strain), and inactivated ND oil-emulsion vaccine (La Sota strain). The protective effects were evaluated based upon the level of antibody response and the degree of protection against the goose-origin virulent NDV strain. The result showed that two doses (i.e., one more than that for chicken) of La Sota vaccine priming, followed by 2–5 doses of Mukteswar vaccine boosting 2–3 weeks later, not only induced higher HI antibody levels, but also conferred longer-lasting protection. This immunization procedure can be recommended for prevention of ND in geese.

Eficacia protectora en gansos de las vacunas comerciales contra la enfermedad de Newcastle frente al desafío con un virus virulento de la enfermedad de Newcastle originado en gansos.

Desde 1997, brotes severos de la enfermedad de Newcastle en gansos en muchas regiones de China, han resultado en alta morbilidad y mortalidad con grandes pérdidas económicas para los avicultores, sin embargo, ninguna vacuna específica está licenciada en China para el control de esta enfermedad. En este estudio se inmunizaron gansos con diferentes combinaciones y dosis de varias vacunas comerciales contra le enfermedad de Newcastle incluyendo vacuna con cepa La Sota, vacuna con cepa Mukteswar, vacuna recombinante viva contra influenza aviar y enfermedad de Newcastle (rL-cepa H5) y vacuna emulsionada en aceite para la enfermedad de Newcastle (cepa La Sota). Los efectos protectores fueron evaluados basándose en los niveles de respuesta de anticuerpos y el grado de protección contra la cepa virulenta del virus de la enfermedad de Newcastle. Los resultados mostraron que una vacunación inicial con dosis doble (dos veces más que para pollos) de un preparado con la vacuna cepa La Sota, seguido 2 a 3 semanas después con 2 a 5 dosis de la vacuna con la cepa Mukteswar, no sólo indujeron altos niveles de anticuerpos medidos por la prueba de inhibición de la hemoaglutinación, sino que también confirieron una protección prolongada. Este procedimiento de inmunización puede ser recomendado para la prevención de la enfermedad de Newcastle en gansos.

Abbreviations: AI = avian influenza; AIV = avian influenza virus; HA = hemagglutination; HAU = hemagglutination unit; HI = hemagglutination inhibition; HN = hemagglutinin-neuraminidase; im = intramuscular injection; in = intranasal; LD₅₀ = median lethal dose; nd = not done; ND = Newcastle disease; NDV = Newcastle disease virus; OEV = inactivated oil-emulsion vaccine; sc = subcutaneous; SPF = specific-pathogen-free

In 2002–2003, velogenic Newcastle Disease Virus outbreaks, closely related to the Mexican isolates, were confirmed in the United States (U.S.) in southern California, Arizona, Nevada, and Texas. In this report, virulent NDVs isolated in Mexico between 1998 and 2006 were subjected to biologic characterization, using standard pathogenicity tests, and to phylogenetic analysis. Chicken embryo mean death time (MDT) test results ranged from 39.7 to 61.5 hours, and intracerebral pathogenicity index (ICPI) values were between 1.59 and 1.94, compared to a possible maximum value of 2.0. These isolates showed a dibasic amino acid motif at the fusion protein cleavage site sequence required for host systemic replication. Phylogenetic analysis indicated that the Mexican virulent NDVs belong to the class II, genotype V viruses and can be clearly divided in two groups as follows: isolates from 1998 to 2001 with close epidemiologic relationship with the latest U.S. NDV outbreaks, and phylogenetically distinct viruses, isolated from 2004 to 2006, which showed higher virulence. The assessment of the evolution of viruses from Mexico and other neighboring countries will aid in the U.S surveillance efforts for early detection of highly virulent NDV.

Caracterización biológica y filogenética de virus virulentos de la enfermedad de Newcastle circulando en México.

Durante los años 2002 y 2003, se confirmaron en los Estados Unidos, específicamente en el sur de California, en Arizona, Nevada y Texas, brotes de virus velogénicos de la enfermedad de Newcastle cercanamente relacionados con aislamientos Mexicanos. En el presente reporte, virus velogénicos de la enfermedad de Newcastle aislados en México entre los años 1998 y 2006 fueron sometidos a caracterización biológica utilizando pruebas estándar de patogenicidad y análisis filogenéticos. Los resultados de la prueba de tiempo promedio de muerte embrionaria se ubicaron en un rango de 39.7 a 61.5 horas, mientras que los valores para el índice de patogenicidad intracerebral fueron entre 1.59 y 1.94, comparados con un valor máximo de 2.0. Molecularmente, los aislamientos mostraron un motivo dibásico de aminoácidos en la secuencia del sitio de corte de la proteína de fusión requerido para la replicación sistémica en el huésped. El análisis filogenético indicó que los virus virulentos de la enfermedad de Newcastle originados en México pertenecen a los virus de la clase II en el genotipo V y pueden dividirse claramente en dos grupos: virus aislados entre los años 1998 y 2001, con una relación epidemiológica cercana con los virus responsables de los últimos brotes de la enfermedad de Newcastle ocurridos en los Estados Unidos, y un grupo de virus filogenéticamente distintos aislados desde el año 2004 hasta el año 2006 que mostraron una mayor virulencia. La evaluación de la evolución de los virus de México y otros países vecinos ayudará en los esfuerzos de vigilancia y detección temprana de virus de la enfermedad de Newcastle de alta patogenicidad adelantada por los Estados Unidos.

Abbreviations: bp = base pair(s); END = exotic Newcastle disease; ICPI = intracerebral pathogenicity index; MDT = mean death time; ML = maximum likelihood; NDV = Newcastle diseases virus; OIE = World Organisation for Animal Health; RT-PCR = reverse transcriptase- polymerase chain reaction; SPF = specific pathogen free

This paper describes the characterization of four double-stranded ribonucleic acid segments, S1, S2, S3, and S4, of a newly identified pathogenic reovirus from parrots. The four segments share a unique 5′ terminus GCUUUUC. The amino-acid sequences of the conserved sigma A and sigma NS proteins show less than 60% sequence similarity, whereas those of the outer capsid proteins sigma B and sigma C have at most 47% sequence similarity to their counterparts in other bird or bat reoviruses. In a phylogenetic analysis of the amino-acid sequences, the proteins coded for by the S1 segment, P10, P17, and sigma C, group with their homologous proteins in other avian reoviruses, whereas the major capsid protein, sigma B, and the nonstructural protein, sigma NS, show more sequence similarity to their bat reoviral counterparts. The phylogenetic relationship of sigma A with the homologous avian and bat sequences is unresolved. The possibility that the parrot reovirus has evolved from an ancestral, more batlike reovirus is discussed. It is proposed to designate this unique virus as PsRV.

Este artículo describe la caracterización de cuatro segmentos de ácido ribonucléico de cadena doble, S1, S2, S3, y S4, pertenecientes a un reovirus de los loros identificado recientemente. Los cuatro segmentos comparten un terminal 5′ único: GCUUUUC. La secuencia de aminoácidos de las proteínas sigma A y la proteína no estructural (NS) muestran menos de 60% de similitud con sus contrapartes en los reovirus de murciélagos y de otros pájaros, mientras las secuencias de las proteínas de la cápsula externa, sigma B y sigma C tienen un máximo de 47% de similitud. En un análisis filogenético de la secuencia de aminoácidos, las proteínas codificadas por el segmento S1, P10, P17 y sigma C, se agruparon con las proteínas homólogas pertenecientes a otros reovirus aviares, mientras que la proteína principal del cápsido, la proteína sigma B y la proteína no estructural sigma NS, muestran similitud en la secuencia a sus contrapartes en los reovirus de murciélago. La relación filogenético de sigma A con las secuencias homólogas en aves y murciélagos no se ha aclarado. Se discute la posibilidad de que el reovirus de los loros haya evolucionado de un reovirus ancestral más parecido a los reovirus de murciélago. Se propone designar a este virus nuevo como PsRV.

Abbreviations: AMV = avian myeloblastosis virus; ARV = avian reovirus; BLAST = Basic Local Alignment Search Tool; BRV = baboon reovirus; DNA = deoxyribonucleic acid; DRV = duck reovirus; EDTA = ethylenediaminetetraacetic acid; ERS = enteric reovirus strain; GRV = goose reovirus; kb = kilobases; MEGA = Molecular Evolutionary Genetics Analysis; MRV = mammalian reovirus; NBV = Nelson Bay virus; NJ = neighbor-joining; NT(s) = nucleotide(s); ORF = open reading frame; PCR = polymerase chain reaction; PRV = Pulau reovirus; PsRV = psittacine reovirus; RNA = ribonucleic acid; RT = reverse transcriptase; TAE = tris-acetate-EDTA; TRV NC = turkey reovirus North Carolina; TVAV = Tvarminne avian virus; USDA = United States Department of Agriculture; USFWS = United States Fish and Wildlife Service; UTR = untranslated region

Análisis de la secuencia de cuatro segmentos genómicos de ARN de cadena doble revela un Orthoreovirus con un genotipo único que infecta psitácidos.

Tetracycline (tet) resistance in Campylobacter isolated from organically raised broilers was investigated in this study. Two hundred forty-five samples from an organic broiler farm were collected weekly from the first week to the end of the production cycle, and they were cultured for thermophilic Campylobacter. Tetracycline resistance of these Campylobacter isolates was identified by the agar dilution method, whereas DNA fingerprinting profiles of tet-susceptible and tet-resistant strains were determined by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). None of the Campylobacter isolates from the third and the fourth week of the production period were resistant to tetracycline, whereas 66.7% of the isolates from the fifth week were resistant to this antibiotic. Although the prevalence of tetracycline resistance reached 100.0% during the sixth and seventh week, less than 34.0% of the isolates from the 10th week were resistant to this antimicrobial agent. In addition, only 13.8% of Campylobacter isolates from the intestinal tracts of these organically raised broilers were resistant to tetracycline. The presence of the tet(O) gene was detected in 98.9% of tet-resistant Campylobacter isolates, and tet-susceptible and tet-resistant Campylobacter strains showed distinct PFGE genotypes. The results suggest that the Campylobacter strains isolated from the early stage of the production were susceptible to tetracycline, but they were subsequently displaced by tet-resistant Campylobacter.

Nota de Investigación—Prevalencia de Campylobacter resistente a tetraciclina en pollos de engorde orgánicos durante un ciclo de producción.

En este estudio se investigó la resistencia a la tetraciclina en Campylobacter aislados de pollos de engorde criados de manera orgánica. Se tomaron semanalmente 245 muestras de una granja orgánica de pollos de engorde desde el inicio hasta el final del ciclo de producción y fueron analizadas para determinar la presencia de Campylobacter termofílico. La resistencia a la tetraciclina en estos aislamientos de Campylobacter se determinó mediante el método de dilución en agar, mientras que los patrones de restricción del ADN de cepas susceptibles y resistentes a la tetraciclina fueron determinados mediante electroforesis en campo de pulsaciones. Ninguno de los aislamientos de Campylobacter del periodo correspondiente a la tercera o cuarta semana de producción resultaron resistentes a la tetraciclina, mientras que el 66.7% de los aislamientos a partir de la quinta semana resultaron resistentes a este antibiótico. Aun cuando la prevalencia de la resistencia a tetraciclina alcanzó un 100% durante la sexta y séptima semana de edad, menos del 34% de los aislamientos de la décima semana eran resistentes a este agente antimicrobiano. Adicionalmente, solo13.8% de los aislamientos de Campylobacter provenientes del tracto intestinal de estos pollos de engorde criados de manera orgánica eran resistentes a la tetraciclina. Se detectó la presencia del gen tet(O) en 98.9% de los aislamientos de Campylobacter resistentes a la tetraciclina y las cepas de Campylobacter susceptibles y resistentes a la tetraciclina mostraron patrones diferentes de electroforesis en campo de pulsaciones. Los re

Mycoplasma gallisepticum (MG) is an important avian pathogen causing significant economic losses within the poultry industry. In an effort to develop tools to aid in MG research and diagnostics, we have compared sequences of the attenuated MG vaccine strain ts-11 to those of commonly used pathogenic challenge strains in search of a simple means of differentiation. Via gapA sequence alignments and comparisons, we have identified and designed primers facilitating strain differentiation. When applied to conventional polymerase chain reaction (PCR) assay at low annealing temperature, the primer sets allow for the differentiation of MG attenuated vaccine strains ts-11 as well as the attenuated MG vaccine strain 6/85 from the commonly utilized MG challenge strains R_low, R, and S6. Conventional PCR differentiation is based on the visualization of sole products with the attenuated MG strains ts-11 and 6/85 and the lack of the corresponding products from MG strains R_low, R, and S6. When applied to MG strain F, product visualization varies with the applied primer set. The differentiation of MG strains ts-11 and 6/85 from the pathogenic challenge strains was also accomplished via real-time analyses, however, the primer sets were not able to differentiate MG strains ts-11 and 6/85 from selected MG field isolates.

Nota de Investigación—Diferenciación mediante reacción en cadena por la polimerasa de las cepas vacunales de Mycoplasma gallisepticum ts-11 y 6/85 de las cepas de Mycoplasma gallisepticum comúnmente utilizadas para desafío.

El Mycoplasma gallisepticum es un patógeno aviar importante que causa pérdidas económicas significativas en la industria avícola. En un esfuerzo para desarrollar herramientas que ayuden en la investigación y diagnóstico del Mycoplasma gallisepticum, se compararon las secuencias de la cepa atenuada de Mycoplasma gallisepticum ts-11 con las de cepas patogénicas comúnmente utilizadas para desafío buscando formas simples para diferenciarlas. Mediante alineamientos de secuencias y comparaciones del gen gapA, se identificaron y diseñaron iniciadores que facilitan la diferenciación de las cepas. Cuando se utilizan en una prueba convencional de reacción en cadena por la polimerasa, los iniciadores permiten la diferenciación de las cepas vacunales atenuadas de Mycoplasma gallisepticum ts-11 y 6/85, de las cepas de Mycoplasma gallisepticum R_low, R, y S6, comúnmente utilizadas para desafíos. La diferenciación mediante la prueba convencional de reacción en cadena por la polimerasa se basa en la detección de un producto individual con las cepas atenuadas ts-11 y 6/85 y la carencia de los productos correspondientes con las cepas de Mycoplasma gallisepticum R_low, R, y S6. Cuando los iniciadores se utilizan con la cepa F de Mycoplasma gallisepticum la visualización es variable. La diferenciación de las cepas de Mycoplasma gallisepticum ts-11 y 6/85 de las cepas de desafío, también se realizó mediante análisis en tiempo real, sin embargo, los iniciadores no fueron capaces de diferenciar las cepas Mycoplasma gallisepticum ts-11 y 6/85 de cepas de campo seleccionadas de Mycoplasma gallisepticum.

Abbreviations: C_T = threshold cycle; FMS = Frey's media with swine serum; MG = Mycoplasma gallisepticum; NTC = no template control; OD = optical density; PBS = phosphate-b

Chickens were intranasally inoculated with the swine influenza virus (SIV) A/swine/NC/307408/04 (H3N2) (NC/04 SIV) to determine the infectivity of a North American SIV for chickens, as well as the possibility of chicken meat serving as a transmission vehicle for SIV. White leghorn (WL) layer-type chickens were used for initial pathotyping and infectivity tests, and a more comprehensive intranasal pathogenesis study was done with white Plymouth rock (WPR) broiler-type chickens. None of the NC/04 SIV-inoculated WL or WPR chickens displayed clinical signs. Serologic tests showed that the virus was able to infect both intranasally inoculated WL and WPR chickens, but the antibody titers were low, suggesting inefficient replication. Some of the NC/04 SIV-inoculated WL chickens shed low levels of virus, mostly from the alimentary tract, but viral shedding was not detected in NC/04 SIV-inoculated WPR chickens. The comprehensive pathogenesis study demonstrated that the virus did not cause systemic infections in WPR chickens, and feeding breast and thigh meat from the NC/04 SIV-inoculated WPR to WL chickens did not transmit NC/04 SIV.

Abbreviations: AI = avian influenza; AIV = avian influenza virus(es); BHI = brain-heart infusion medium; DPI = days postinoculation; ECE = embryonating chicken egg; EID₅₀ = 50% chicken embryo infective dose; GMT = geometric mean titer; H = hemagglutinin; HI = hemagglutinin inhibition; HPAIV = high pathogenicity avian influenza virus(es); HPNAI = high pathogenicity notifiable avian influenza; LPAI = low pathogenicity avian influenza; LPNAI = low pathogenicity notifiable avian influenza; N = neuraminidase; OIE = World Organization for Animal Health; SIV = swine influenza virus; SPF = specific-pathogen-free; WL = white leghorn; WPR = white Plymouth rock

Nota de Investigación—Susceptibilidad limitada y carencia de infección sistémica en pollos inoculados intranasalmente con un virus H3N2 de influenza porcina.

Para determinar la infectividad en pollos de un virus Norteamericano de influenza porcina, así como la posibilidad de que la carne de pollo sirva como un vehículo de transmisión para el virus de influenza porcina, se inocularon pollos por vía intranasal con un virus H3N2 de influenza porcina designado A/cerdo/NC/307408/04 (por sus siglas en Inglés NC/04SIV). Para las pruebas iniciales de patotipificación e infectividad se utilizaron aves de la línea leghorn blanca y un estudio de patogenicidad más completo se realizó con aves de la línea de engorde (Plymouth rock). Ninguna de las aves leghorn blancas o Plymouth rock inoculadas con el virus NC/04SIV mostraron signos clínicos. Las pruebas serológicas demostraron que el virus fue capaz de infectar por vía intranasal a ambos tipos de aves, sin embargo, los títulos de anticuerpos fueron bajos sugiriendo una replicación ineficiente. Algunas de las aves leghorn blancas diseminaron bajos niveles del virus, predominantemente del tracto alimenticio. En las aves Plymouth rock inoculadas con el virus NC/04SIV no se detectó diseminación viral. El estudio completo de patogénesis demostró que el virus no causó infección sistémica en pollos Plymouth rock y que alimentar carne de pechuga y muslos proveniente de aves leghorn blancas y Plymouth rock inoculadas con el virus NC/04 SIV no transmitió el virus.

In order to detect and characterize avian metapneumovirus, organs or swabs were collected from 697 chicken and 110 turkeys from commercial farms in Southwestern Nigeria and from 107 chickens from live bird markets in Southeastern China. In Nigeria, 15% and 6% of the chicken and turkey samples, respectively, and 39% of the chicken samples from China, were positive for aMPV genome by PCR. The sequence of a 400 nt fragment of the attachment protein gene (G gene) revealed the presence of aMPV subtype A in both Nigeria and Southeastern China. Essentially identical subtype A viruses were found in both countries and were also previously reported from Brazil and the United Kingdom, suggesting a link between these countries or a common source of this subtype. In Nigeria, subtype B was also found, which may be a reflection of chicken importations from most major poultry-producing countries in Europe and Asia. In order to justify countermeasures, further studies are warranted to better understand the metapneumoviruses and their impact on poultry production.

Nota de Investigación—Metapneumovirus aviar subtipo A en China y subtipos A y B en Nigeria.

Con la finalidad de detectar y caracterizar metapneumovirus aviares se colectaron órganos o hisopos de 697 pollos y 110 pavos provenientes de granjas comerciales el Suroeste de Nigeria y de 107 pollos provenientes de mercados de aves vivas del Sureste de China. En Nigeria, el 15% y 6% de las muestras de pollos y pavos, respectivamente y el 39% de las muestras de pollos provenientes de China, resultaron positivas para el genoma de metapneumovirus aviar mediante la prueba de reacción en cadena por la polimerasa. La secuencia de un fragmento de 400 nucleótidos del gen que codifica para la proteína de adhesión (proteína G), reveló la presencia de metapneumovirus aviar subtipo A tanto en Nigeria como en el Sureste de China. En ambos países se detectaron virus esencialmente idénticos del subtipo A, ya reportados para Brasil y el Reino Unido, sugiriendo una relación entre estos países y/o una fuente común para este subtipo. En Nigeria, también se encontró el subtipo B, lo que puede ser el reflejo de importaciones desde los principales productores de aves domésticas en Europa y Asia. Con la finalidad de justificar la toma de medidas, se deben realizar nuevos estudios para comprender mejor los metapneumovirus y su impacto en la producción de aves domésticas.

Abbreviations: aa = amino acid(s); AIV = avian influenza virus; aMPV = avian metapneumovirus; CAV = chicken anemia virus; DNA = deoxyribonucleic acid; IBV = infectious bronchitis virus; ILTV = infectious laryngotracheitis virus; PCR = polymerase chain reaction; RNA = ribonucleic acid; TCID₅₀ = tissue culture infective dose 50%

The objective of this study was to understand the distribution patterns and levels of Salmonella Enteritidis (SE) in the immune organs of ducklings after oral challenge. We conducted serovar-specific real-time polymerase chain reaction (PCR) for SE to detect the genomic DNA of SE in the blood and immune organs, including the bursa of Fabricius, thymus, spleen, and Harderian gland, from ducklings after oral challenge at different time points. The results showed that SE was consistently detected in all the samples. The Harderian gland and spleen tested positive at 8 hr postinoculation (PI). The organism was detected in the blood, bursa of Fabricius, and thymus at 10 hr PI. The copy number of SE DNA in each tissue reached a peak at 24–36 hr PI. The spleen, blood, and Harderian gland contained high concentrations of SE, whereas the thymus and bursa of Fabricius had low concentrations. SE populations began to decrease and were not detectable at 2 days PI, but they were still present up to 9 days PI in the spleen, without producing any apparent symptoms. To validate these results, the indirect immunofluorescent antibody (IFA) technique was used, and the IFA results were similar to those of the fluorescent quantitative-PCR. In conclusion, the results provided insight into the SE life cycle in the immune organs; furthermore, the Harderian gland and spleen were determined to be the primary sites of invasion among the immune organs of normal ducklings after oral SE challenge. This study will help in understanding the pathogenesis of SE infection in vivo and may help in the development of a live Salmonella vaccine in the future.

Nota de Investigación—Estudio de los niveles y patrones de distribución de Salmonella Enteritidis en los órganos inmunológicos de patos jóvenes posterior a un desafío oral, mediante una prueba de reacción en cadena por la polimerasa en tiempo real específica de serovar.

El objetivo del presente estudio fue evaluar los niveles y patrones de distribución de Salmonella Enteritidis en los órganos inmunológicos de patos jóvenes posterior a un desafío oral. A diferentes tiempos después de la inoculación, se realizó la prueba de reacción en cadena por la polimerasa en tiempo real para Salmonella Enteritidis para detectar el ADN genómico de la Salmonella Enteritidis en la sangre y órganos inmunes (bolsa de Fabricio, timo, bazo y glándula de Harder) en patos jóvenes. Los resultados mostraron que la Salmonella Enteritidis se detectó consistentemente en todas las muestras. La glándula de Harder y el bazo resultaron positivos ocho horas posteriores a la inoculación (P.I.). El organismo se detectó en la sangre, en la bolsa de Fabricio y en el timo diez horas P.I. El número de copias de ADN de Salmonella Enteritidis en cada tejido alcanzó un nivel máximo entre 24 y 36 horas P.I. El bazo, la sangre y la glándula de Harder contenían altas concentraciones de Salmonella Enteritidis, mientras que el timo y bolsa de Fabricio mostraron concentraciones bajas. Las poblaciones de Salmonella Enteritidis comenzaron a disminuir y dejaron de ser detectables dos días P.I, pero en el bazo estaban presentes hasta por nueve días P.I sin producir síntomas aparentes. Para validar estos resultados se utilizó la técnica de inmunofluorescencia indirecta, los resultados de esta prueba fueron similares a los de la prueba de reacción en cadena por la polimerasa cuantitativa de fluorescencia. En conclusión, los resultados proporcionaron información sobre el ciclo de vida de la <

In order to determine the mutations responsible for virulence, three Croatian field infectious bursal disease viruses (IBDV), designated Cro-Ig/02, Cro-Po/00, and Cro-Pa/98 were characterized. Coding regions of both genomic segments were sequenced, and the nucleotide and deduced amino acid sequences were compared with previously reported full-length sequenced IBDV strains. Phylogenetic analysis, based on the nucleotide and deduced amino acid sequences of polyprotein and VP1, was performed. Eight characteristic amino acid residues, that were common to very virulent (vv) IBDV, were detected on polyprotein: 222A, 256I, 294I, 451L, 685N, 715S, 751D, and 1005A. All eight were found in Cro-Ig/02 and Cro-Po/00. C-Pa/98 had all the characteristics of an attenuated strain, except for glutamine on residue 253, which is common for vv, classical virulent, and variant strains. Between less virulent and vvIBDV, three substitutions were found on VP5: 49 G→R, 79 I→F, and 137 R→W. In VP1, there were nine characteristic amino acid residues common to vvIBDV: 146D, 147N, 242E, 390M, 393D, 511S, 562P, 687P, and 695R. All nine residues were found in A-Ig/02, and eight were found in B-Po/00, which had isoleucine on residue 390. Based on our analyses, isolates Cro-Ig/02 and Cro-Po/00 were classified with vv IBDV strains. C-Pa/98 shared all characteristic amino acid residues with attenuated and classical virulence strains, so it was classified with those.

Nota de Investigación—Análisis de la secuencia de ambos segmentos del genoma de tres cepas de campo del virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa de Fabricio, provenientes de Croacia.

Con el fin de determinar las mutaciones responsables de su virulencia, se caracterizaron tres virus de campo de la enfermedad infecciosa de la bolsa de Fabricio provenientes de Croacia, estos virus se identificaron como Cro-Ig/02, Cro-Po/00 y Cro-Pa/98. Las regiones codificadas de ambos segmentos genómicos fueron secuenciadas y las secuencias de nucleótidos y amanoácidos fueron comparadas con secuencias previamente reportadas de cepas del virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa. También se llevó a cabo el análisis filogenético basado en las secuencias de nucleótidos de la proteína viral 1 y de la poliproteína. Ocho residuos de aminoácidos característicos, que fueron comunes para el virus muy virulento de Gumboro, fueron detectados en la poliproteína: 222A, 256I, 294I, 451L, 685N, 715S, 751D y 1005A. Los ocho fueron encontrados en los virus Cro-Ig/02 y Cro-Po/00. El virus C-Pa/98 tenía todas las características de una cepa atenuada, excepto por el residuo de glutamina en la posición 253, que es común para los virus muy virulentos, las cepas clásicas y las cepas variantes. Entre las cepas menos virulentas y las muy virulentas del virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa, se encontraron tres sustituciones en la proteína viral 5: 49 G→R, 79 I→F y 137 R→W. En la proteína viral 1, se encontraron nueve residuos de aminoácidos característicos comunes al virus muy virulento, estos fueron: 146D, 147N, 242E, 390M, 393D, 511S, 562P, 687P y 695R. Los nueve residuos fueron encontrados en A-Ig/02, y ocho en B-Po/00, el cual tenía isoleucina en el residuo 390. Basados en nuestros análisis, los aislamientos Cro-Ig/02 y Cro-Po/00 fueron clasificados como cepas muy virulentas del virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa. La cepa C-Pa/98 compartió todos los residuos de aminoácidos característicos de las cepas atenuadas y virulentas clásicas, por lo que se clasificó como tal.

Abbreviations: cDNA = copy DNA; dNTP = deoxyribonucleotide triphosphate; IBD = infectious bursal disease; IBDV = infectious bursal disease virus; N-J = neighbor-joining; ORF = open reading frame; PCR = polymerase chain reaction; RE = restriction endonuclease; RdRp = RNA-dependent RNA polymerase; RT = reverse transcriptase; RT-PCR = rev

An avian poxvirus from the beak scab of an American flamingo (Phoeniconais ruber rubber) was isolated by inoculation on the chorioallantoic membrane (CAM) of specific-pathogen-free (SPF) chicken embryos. The virus produced multifocal areas of epithelial hyperplasia along with foci of inflammation in the CAM, and rare cells contained small eosinophilic intracytoplasmic bodies. Chickens inoculated with the isolated virus in the feather follicle of the leg did not develop significant lesions. Nucleotide sequence comparison of a PCR-amplified 4.5 kb HindIII fragment of the genome of flamingo poxvirus (FlPV) revealed very high homology (99.7%) with condor poxvirus (CPV), followed by approximately 92% similarity with canary poxvirus (CNPV) and Hawaiian goose poxvirus (HGPV), but less similarity (∼69%) to fowl poxvirus (FPV), the type species of the genus Avipoxvirus of family Poxviridae. As in the cases with CPV, CNPV, and HGPV, genetic analysis of FlPV revealed an absence of three corresponding FPV open reading frames (ORF199, 200, and 202) and an absence of any reticuloendotheliosis virus (REV) sequences in this region. There are only nine nucleotide substitutions observed between FlPV and CPV in the 4.5 kb fragment; those were clustered in the ORF201 region, which in FPV genome is a site for integration of REV sequences. Phylogenetic analysis of the predicted amino acid sequences of the ORF201-coded hypothetical protein demonstrated FlPV to be more closely related to CPV, as well as to CNPV and HGPV, than to FPV.

Nota de Investigación—Caracterización molecular de un virus de viruela aislado de un flamingo americano (Phoeniconais ruber rubber).

Se aisló un virus de viruela aviar a partir de una costra en el pico de un flamingo americano (Phoeniconais ruber rubber). El virus fue aislado mediante la inoculación en la membrana corioalantoidea de embriones de pollo libres de patógenos aviares específicos. El virus produjo áreas multifocales de hiperplasia epitelial junto con focos de inflamación en la membrana corioalantoidea de embriones de pollo, y pocas células tenían pequeños cuerpos de inclusión intracitoplasmáticos. Pollos inoculados en la piel de la pierna con el virus aislado no desarrollaron lesiones significantes. La comparación de la secuencia de nucleótidos de un fragmento de 4.5 Kb cortado con la endonucleasa HindIII y amplificado por medio de la prueba de reacción en cadena por la polimerasa, reveló una alta homología (99.7%) con un virus de viruela de cóndor, seguido de un 92% de similitud con un virus de viruela de canario y con uno de ganso de Hawaii, pero mostró una similitud menor (aprox. 69%) con el virus de viruela de pollos que es la especie representativa del género Avipoxvirus perteneciente a la familia Poxviridae (virus de viruela). Como en el caso con el virus de cóndor, virus de canario y de ganso de Hawaii, los análisis genéticos del virus de flamingo mostraron la ausencia de tres marcos abiertos de lectura del correspondiente virus de viruela de los pollos (marcos de lectura 199, 200 y 202), como también la ausencia de secuencias de virus de retículoendoteliosis en esta región. En el fragmento de 4.5 Kb, hay sólo nueve sustituciones de nucleótidos que se observan entre el virus del flamingo y el del cóndor, estas sustituciones están agrupadas en la región del marco de lectura 201 que en el virus de viruela aviar es el sitio de integración de las secuencias del virus de retículoendoteliosis. El análisis filogenético de las secuencias de aminoácidos del marco de lectura 201 que codifican para las proteínas, demostraron que el virus del flamingo está más cercanamente relacionado con los virus de viruela del cóndor, lo mismo qu

Outbreaks of hydropericardium syndrome (HPS), caused by fowl adenovirus serotype 4 (FAdV-4), have occurred in Korea and caused severe economic loss due to mortality and weight loss. From these outbreaks, several adenoviruses were isolated and identified in samples from broilers, layers, breeders, and native Korean fowl. In pathologic examinations, hydropericardium and multifocal hepatic necrosis, with an intranuclear inclusion body in hepatocytes, were observed. Specific adenovirus particles were also observed in the nucleus of hepatocytes, by electron microscopic examination. Polymerase chain reaction (PCR) analysis of the hexon gene identified all of the isolates as FAdV, serotype 4 and genotype C. To reproduce FAdV-4 field cases, 8- and 52-week-old specific pathogen free (SPF) chicks were infected intramuscularly with the field isolate CBU070244. The mortality rate of infected chicks ranged from 10%–40%, and specific pathologic lesions, such as swollen livers and hydropericardium, were observed. Further studies to determine the prevalence of infection, and analysis of the economic impact to the poultry industry, are needed in the near future.

Reporte de Caso —Brote del síndrome de hidropericardio y caracterización molecular de aislados de adenovirus aviares de Corea.

Brotes del síndrome hidropericardio causados por adenovirus aviar serotipo 4 han ocurrido en Corea causando graves pérdidas económicas debido a la mortalidad y a los bajos pesos corporales. A partir de pollos de engorde, ponedoras y gallinas nativas de Corea involucradas en estos brotes, se aislaron e identificaron varios adenovirus. En los exámenes patológicos se observó hidropericardio y necrosis hepática multifocal con presencia de cuerpos de inclusión intranucleares en los hepatocitos. Mediante el microscopio electrónico se observaron los adenovirus en el núcleo de los hepatocitos. El análisis de la reacción en cadena por la polimerasa del gen hexón identificó todos los virus aislados como pertenecientes al serotipo 4 y al genotipo C de los adenovirus aviares. Para reproducir la enfermedad, se utilizaron aves libres de patógenos de 8 y 52 semanas de edad, infectándolas por la vía intramuscular con el aislamiento de campo identificado como CBU070244. Los porcentajes de mortalidad de las aves infectadas varió del 10% al 40% y se observaron lesiones específicas como inflamación del hígado e hidropericardio. En el futuro cercano, se necesita realizar estudios adicionales para determinar la prevalencia de la infección y el análisis del impacto económico sobre la industria avícola.

Abbreviations: bp = base pairs; CBNU = Chungbuk National University; CELiC = chicken embryo liver cells; CELO = chicken embryolethal orphan; CPE = cytopathic effect; FAdV = fowl adenovirus; FAdV-4 = fowl adenovirus serotype 4; HPS = hydropericardium syndrome; PCR = polymerase chain reaction; REA = restriction enzyme analysis; SPF = specific pathogen free

Ulcerative enteritis is a disease that typically responds well to medication. An outbreak of ulcerative enteritis that was persistent and unresponsive to treatment is described. The outbreak started in semimature birds and progressively spread to younger birds. Confounding factors leading to this persistence were a significant coccidosis problem, a feed mixing error, and suspected antibiotic resistance. Although Clostridium colinum was never isolated, a bacitracin-resistant Clostridium perfringens was cultured from affected birds. Only the combined treatment of the flocks with an anticoccidial and tylosin was effective in controlling clinical disease. Numerous other management and treatment strategies were unsuccessful in lowering the severe mortality.

Reporte de Caso—Un brote persistente de enteritis ulcerativa en codornices Virginianas (Colinus virginianus).

La enteritis ulcerativa es una enfermedad que típicamente responde bien a la medicación. Se describe un brote de enteritis ulcerativa que fue persistente y no respondió al tratamiento. El brote se inició en aves casi adultas y se diseminó a las aves jóvenes. Los factores concomitantes que condujeron a la persistencia fueron un problema significante de coccidiosis, un error en la mezcla del alimento y la posible resistencia al antibiótico. Aunque el Clostridium colinum no se aisló, una cepa de Clostridium perfringens resistente a la bacitracina fue cultivada a partir de las aves afectadas. Solamente el tratamiento combinado de los lotes con un anticoccidiano y con tilosina fue efectivo para controlar la enfermedad. Numerosas otras estrategias de manejo y tratamiento no tuvieron éxito en disminuir la alta mortalidad.

Abbreviations: BMD = bacitracin methylene disalicytate; CAHFS = California Animal Health and Food Safety; UE = ulcerative enteritis

An adult, male, captive red-tailed hawk (Buteo jamaicensis) of at least 19 years of age presented in dorsal recumbency. The hawk was nonresponsive, and despite initial supportive care, died shortly after presentation. Gross postmortem revealed no abnormal findings. Histologic examination demonstrated atherosclerosis and ischemic cardiomyopathy. This is the first reported case of atherosclerosis in a red-tailed hawk.

Reporte de Caso—Ateroesclerosis y cardiomiopatía isquémica en un macho aguililla de cola roja (Buteo jamaicensis) mantenido en cautiverio.

Un macho adulto aguililla de cola roja (Buteo jamaicensis) mantenido en cautiverio por lo menos durante 19 años fue presentado con recumbencia dorsal. El ave no respondía a los estímulos y a pesar de los cuidados de soporte, murió poco tiempo después. La evaluación macroscópica postmorten no reveló hallazgos anormales. La evaluación histológica demostró ateroesclerosis y cardiomiopatía isquémica. Este es el primer caso reportado de ateroesclerosis en un macho aguililla de cola roja.

Abbreviations: PTAH = phosphotungstic acid–hematoxylin

We describe lesions in 29 adult domestic pigeons (Columba livia) poisoned with chlorophacinone, an indandione anticoagulant rodenticide. Birds were found dead in the field and in dovecotes after a wide-area treatment against common voles (Microtus arvalis) based on the dispersion in the open field of wheat grain treated with 0.005% chlorophacinone. At necropsy, most pigeons showed crops full of red-colored wheat grain, extensive subcutaneous hematoma in neck and breast zones, and hemorrhages in lungs and the coelomic cavity. Chlorophacinone was determined in liver samples by high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection, and the mean (range) concentration was 11.2 (1.48–50.1) µg/g. Pigeons have a venous subcutaneous plexus in the neck zone (plexus venosus subcutaneus collaris), which has been described as an erectile tissue with a thermoregulation function. This case report describes a relationship between the subcutaneous hemorrhagic lesions and the plexus venosus collaris.

Abbreviations: HPLC = high-performance liquid chromatography

Reporte de Caso—Lesiones asociadas con el plexus venosus subcutaneus collaris de palomas intoxicadas por clorofacinona.

Describimos las lesiones de 29 palomas adultas muertas por intoxicación con clorofacinona, un rodenticida anticoagulante inandiónico. Las aves fueron encontradas muertas en el campo y en palomares después de un tratamiento a gran escala contra topillos comunes (Microtus arvalis) basado en la dispersión en campo abierto de grano de trigo tratado con 0,005% de clorofacinona. La mayoría de las palomas presentaron el buche lleno de grano de trigo coloreado de rojo, amplios hematomas en el tejido subcutáneo cervical y de la pechuga, y hemorragias en pulmón y cavidad celómica. La clorofacinona fue determinada en muestras de hígado por cromatografía líquida de alta precisión con detección por luz ultravioleta y la concentración media (rango) fue de 11.2 (1.48-50.1) µg/g. Las palomas tienen un plexo venoso subcutáneo en la zona del cuello (plexus venosus subcutaneus collaris) que ha sido descrito como un tejido eréctil con una función termorreguladora. Este reporte de caso describe la relación entre las lesiones hemorrágicas subcutáneas con el plexus venosus collaris.

Regular necropsy of samples of laying hen mortality at a large cage-layer ranch revealed significant loses due to osteoporosis. The feeding program consisted of feeding a pullet-growing diet until egg production commenced followed by a change to a laying diet. Literature review and experimental results have demonstrated a requirement for 2% dietary calcium for about 2 wk before first egg is anticipated followed by transfer to a higher calcium level during lay. A nutritional regimen of this design was tested on two paired sister flocks of hens. Necropsy of mortality during the tests showed a striking reduction in mortality due to osteoporosis.

Reporte de Caso—Prevención de osteoporosis fatal en ponedoras criadas en jaula.

Necropsias rutinarias de muestras provenientes de la mortalidad de ponedoras en una gran explotación de ponedoras en jaulas, reveló pérdidas significativas debido a osteoporosis. El programa de alimentación consistía en una dieta para pollonas hasta el inicio de la producción seguido de un cambio a dieta de postura. La literatura y los resultados experimentales han demostrado un requerimiento dietético de 2% de calcio hasta aproximadamente dos semanas antes del inicio de la postura, seguido de la transferencia a niveles de calcio más altos durante la postura. En dos parvadas de ponedoras hermanas, se evaluó un régimen nutricional con este diseño. La necropsia de la mortalidad durante la prueba experimental, mostró una reducción significativa de la mortalidad debida a osteoporosis.