Backyard gallinaceous bird flocks may play an important role in the spread of infectious diseases within poultry populations as well as the transmission of zoonotic diseases to humans. An epidemiologic characterization was conducted of Colorado backyard flocks to gather information on general flock characteristics, human movement of birds, human-bird interaction, biosecurity practices, and flock health. Our results suggest that backyard poultry flocks in Colorado are small-sized flocks (68.6% of flocks had <50 birds); consist primarily of layer chickens (85.49% of flocks), show chickens (32.18% of flocks), and waterfowl (34.07% of flocks); and are primarily owned for food (meat or egg) production for the family (86.44%) or as pet or hobby birds (42.27%). The backyard flock environment may promote bird-to-bird transmission as well as bird-to-human transmission of infectious disease. Birds are primarily housed with free access to the outside (96.85%), and many are moved from the home premises (46.06% within 1 yr). Human contact with backyard flocks is high, biosecurity practices are minimal, and bird health is negatively impacted by increased movement events. Increased knowledge of backyard bird characteristics and associated management practices can provide guidelines for the development of measures to decrease disease transmission between bird populations, decrease disease transmission from birds to humans, and increase the overall health of backyard birds.

Caracterización epidemiológica de las parvadas de aves de traspatio en el Estado de Colorado.

Las aves gallinacéas de traspatio pueden jugar un papel importante en la propagación de enfermedades infecciosas en las poblaciones de aves comerciales, así como la transmisión de enfermedades zoonóticas a los seres humanos. En el Estado de Colorado se realizó una caracterización epidemiológica de las parvadas de traspatio para reunir información sobre las características generales de las parvadas, el movimiento de aves por los humanos, la interacción entre los humanos y las aves, las prácticas de bioseguridad y salud de la parvada. Los resultados sugieren que las aves de traspatio en Colorado son de tamaño pequeño (el 68.6% de las parvadas tenían menos de 50 aves), que consisten principalmente en gallinas ponedoras (85.49% de las parvadas), pollos de ornato (32.18% de los rebaños) y aves acuáticas (34.07% de las parvadas), y tienen como finalidad la producción de alimentos (carne o huevo) de forma familiar (86.44%) o como aves de compañía o deportivas (42.27%). El medio ambiente de las parvadas de traspatio puede promover la transmisión de enfermedades infecciosa entre las aves, así como la transmisión de las aves a los humanos. Las aves son alojadas con libre acceso al exterior (96.85%), y muchas son trasladadas de su local original (46.06% dentro un año). También es elevado el contacto entre los humanos con las aves de traspatio, las prácticas de bioseguridad son mínimas, y la salud de las aves se ve afectada negativamente por el aumento de su movilización. Un mayor conocimiento de las características de las aves de traspatio y las prácticas de manejo asociadas pueden proporcionar las pautas para el desarrollo de medidas para reducir la transmisión de enfermedades entre las poblaciones de aves, reducir la transmisión de enfermedades de las aves a los seres humanos y aumentar la salud general de las aves de traspatio.

The efficacy of three commercial Mycoplasma gallisepticum (MG) immunizing agents—a bacterin, a recombinant fowlpox-MG vaccine, and a live F-strain vaccine—was compared in specific-pathogen-free hens in egg production. Three groups of 25 chickens were vaccinated with one of the vaccines at 10 wk of age and 25 birds were not vaccinated. At 25 wk of age (and approximately 50% egg production), 20 birds from each of the three vaccinated groups and 15 nonvaccinated controls were challenged with virulent R-strain via aerosol; the birds were necropsied and evaluated at 10 days post-challenge. The MG bacterin and live F-strain vaccinations were both protective and resulted in significant differences in air sac lesions, tracheal lesions, and ovarian regression compared to the nonvaccinated controls and the recombinant fowlpox-MG vaccine (P ≤ 0.05). The evaluation of ovarian regression is a useful method of testing the efficacy of MG vaccines in laying hens.

Eficacia de tres vacunas comerciales contra Mycoplasma gallisepticum en gallinas ponedoras.

La eficacia de tres agentes inmunizantes comerciales de Mycoplasma gallisepticum: una bacterina, una vacuna recombinante de viruela aviar/M. gallisepticum, y una vacuna viva con la cepa F, se compararon en gallinas libres de patógenos específicos que estaban en la etapa de producción de huevos. Tres grupos de 25 pollos fueron vacunados con una de las vacunas a las 10 semanas de edad y se dejaron 25 aves no vacunadas. A las 25 semanas de edad (y aproximadamente alrededor del 50% de la producción de huevo), 20 aves de cada uno de los tres grupos vacunados y 15 controles no vacunados se desafiaron con la cepa virulenta R, a través de aerosoles, se evaluaron las aves y se les practicó la necropsia a los 10 días después del desafío. La bacterina de M. gallisepticum y la vacuna viva con la cepa F, confirieron protección y mostraron diferencias significativas en las lesiones en los sacos aéreos, en las lesiones traqueales, y la regresión del ovario en comparación con los controles no vacunados y con las aves vacunadas con la vacuna recombinante de viruela aviar/M. gallisepticum (P ≤ 0.05). La evaluación de la regresión de ovario es un método útil para probar la eficacia de las vacunas contra M. gallisepticum en las gallinas ponedoras.

In order to develop better control measures against avian influenza, it is necessary to understand how the virus transmits in poultry. In a previous study in which the infectivity and transmissibility of the pandemic H1N1 influenza virus was examined in different poultry species, we found that no or minimal infection occurred in chicken and turkeys intranasally (IN) inoculated with the virus. However, we demonstrated that the virus can infect laying turkey hens by the intracloacal (IC) and intraoviduct (IO) routes, possibly explaining the drops in egg production observed in turkey breeder farms affected by the virus. Such novel routes of exposure have not been previously examined in chickens and could also explain outbreaks of low pathogenicity avian influenza (LPAI) that cause a decrease in egg production in chicken layers and breeders. In the present study, 46-wk-old specific-pathogen-free chicken layers were infected by the IN, IC, or IO routes with one of two LPAI viruses: a poultry origin virus, A/chicken/CA/1255/02 (H6N2), and a live bird market isolate, A/chicken/NJ/12220/97 (H9N2). Only hens IN inoculated with the H6N2 virus presented mild clinical signs consisting of depression and anorexia. However, a decrease in number of eggs laid was observed in all virus-inoculated groups when compared to control hens. Evidence of infection was found in all chickens inoculated with the H6N2 virus by any of the three routes and the virus transmitted to contact hens. On the other hand, only one or two hens from each of the groups inoculated with the H9N2 virus shed detectable levels of virus, or seroconverted and did not transmit the virus to contacts, regardless of the route of inoculation. In conclusion, LPAI viruses can also infect chickens through other routes besides the IN route, which is considered the natural route of exposure. However, as seen with the H9N2 virus, the infectivity of the virus did not increase when given by these alternate routes.

Los virus de la influenza aviar de baja patogenicidad infectan a gallinas de postura por diferentes vías de inoculación.

Con el fin de desarrollar mejores medidas de control contra la influenza aviar, es necesario entender cómo se transmite el virus dentro de la avicultura comercial. En un estudio previo en el que se examinó la infectividad y la transmisibilidad del virus de la influenza pandémico H1N1 entre diferentes especies de aves, se encontró que la infección es nula o mínima en pollos y pavos inoculados con este virus por vía intranasal. Sin embargo, se ha demostrado que el virus puede infectar pavas reproductoras en producción por las rutas intracloacal e intraoviductal, lo que puede explicar las bajas en la producción de huevos observadas en las granjas de pavos reproductoras afectadas por el virus. Estas nuevas rutas de exposición no habían sido previamente examinadas en los pollos y también podrían explicar los brotes de influenza aviar de baja patogenicidad, que causan una disminución en la producción de huevos en las gallinas de postura y en las aves reproductoras. En el presente estudio, se infectaron aves de postura de 46 semanas de edad libres de patógenos específicos por las rutas intranasal, intracloacal, o intraoviductal con uno de dos virus de la influenza aviar de baja patogenicidad: un virus de origen aviar, el aislamiento denominado A/pollo/CA/1255/02 (H6N2), y un aislamiento obtenido de un mercado de aves vivas, A/pollo/NJ/12220/97 (H9N2). Solamente las gallinas inoculadas por vía intranasal con el virus H6N2 presentaron leves signos clínicos consistentes en depresión y anorexia. Sin embargo, se observó disminución en el número de huevos producidos en todos los grupos inoculados con los virus cuando se compararon con las gallinas del grupo control. Se encontró evidencia de infección en todos los pollos inoculados con el virus H6N2 por cualquiera de las tres rutas y el virus se transmitió a gallin

Newcastle disease (ND) is a highly contagious disease of chickens causing significant economic losses worldwide. Due to the limitation in their efficacy, current vaccination strategies against ND need improvements. This study aimed to evaluate a new-generation ND vaccine for its efficacy in providing clinical protection and reducing virus shedding after challenge. Broiler chickens were vaccinated in ovo or subcutaneously at hatch with a turkey herpesvirus-based recombinant vaccine (rHVT) expressing a key protective antigen (F glycoprotein) of Newcastle disease virus (NDV). Groups of birds were challenged at 20, 27, and 40 days of age with a genotype V viscerotropic velogenic NDV strain. Protection was 57% and 81%, 100% and 95%, and 100% and 100% after the subsequent challenges in the in ovo and subcutaneously vaccinated chickens, respectively. Humoral immune response to vaccination could be detected from 3–4 wk of age. Challenge virus shedding was lower and gradually decreased over time in the vaccinated birds compared to the unvaccinated control chickens. In spite of the phylogenetic distance between the NDV F gene inserted into the vector vaccine and the challenge virus (genotype I and V, respectively), the rHVT NDV vaccine provided good clinical protection and significantly reduced challenge virus shedding.

Avances en la vacunación contra la enfermedad de Newcastle: Una vacuna recombinante contra la enfermedad de Newcastle con el vector HVT ofrece una alta protección clínica y reduce la eliminación del virus de desafío con ausencia de reacciones a la vacuna.

La enfermedad de Newcastle (ND) es una enfermedad altamente contagiosa de los pollos que causa importantes pérdidas económicas en todo el mundo. Debido a las limitaciones en su eficacia, las actuales estrategias de vacunación contra dicha enfermedad necesitan mejorarse. Este estudio tuvo como objetivo evaluar una vacuna de nueva generación contra la enfermedad de Newcastle en su eficacia para conferir protección clínica y reducir la diseminación del virus después del desafío. Pollos de engorde fueron vacunados al nacimiento por las vías in ovo o subcutánea con una vacuna recombinante con un virus herpes de pavo como vector (rHVT) que expresaba un antígeno protector clave (la glicoproteína F) del virus de la enfermedad de Newcastle. Grupos de aves fueron desafiadas a los 20, 27 y 40 días de edad con una cepa velogénica viscerotrópica genotipo V del virus de Newcastle. La protección fue del 57% y 81%, de 100% y 95%, y del 100% y 100% después de los desafíos posteriores en los pollos vacunados in ovo o por vía subcutánea, respectivamente. La respuesta inmune humoral a la vacunación pudo ser detectada a partir de tercera y cuarta semanas de edad. La diseminación del virus de desafío fue menor y disminuyó gradualmente a lo largo del tiempo en las aves vacunadas en comparación con los pollos control no vacunados. A pesar de la distancia filogenética entre el gene F del virus de Newcastle insertado en la vacuna de vector y el virus de desafío (genotipo I y V, respectivamente), la vacuna rHVT contra el virus de Newcastle proporcionó una buena protección clínica y una reducción significativa en la eliminación del virus de desafío.

Rodents play a major role in the transmission and maintenance of Salmonella contamination cycles in poultry facilities. However, very limited field data are available regarding the transmission routes, infection cycle, and shedding patterns of Salmonella by naturally infected wild rodents from commercial layer farms. In this study, a total of 128 resident wild roof rats (Rattus rattus) were captured from a Salmonella-contaminated layer facility. All roof rats were divided into 51 laboratory cages, and weekly monitoring of Salmonella fecal shedding patterns was conducted for 53 wk. Seven roof rats from cages that were observed to frequently shed Salmonella were isolated in individual cages, and daily Salmonella monitoring was performed for 35 days. At the end of monitoring, each roof rat was euthanatized, and isolation of Salmonella from different organs was performed. Results of weekly monitoring of Salmonella showed that 21 of 51 cages (41.2%) were positive for Salmonella Infantis, while two cages (3.92%) were positive for Salmonella Enteritidis. Moreover, 11 cages were positive for Salmonella for at least two sampling weeks. Isolation of Salmonella from fecal droppings was mainly observed during the first 12 wk of captivity. The longest interval between two Salmonella-positive fecal dropping was 24 wk. In the daily Salmonella monitoring, only Salmonella Infantis was isolated from fecal droppings, in which the highest number of Salmonella Infantis organisms per fecal dropping was at 1 × 10⁸ colony-forming units (cfu), while the lowest measured quantity was 1 × 10³ cfu. It was noted that the frequency of Salmonella shedding in fecal droppings appeared to have a linear correlation (r  =  0.85) with the number of Salmonella organisms (cfu) per fecal pellet (P < 0.05). Moreover, pulsed-field gel electrophoresis analysis of Salmonella Infantis isolates revealed a single identical pulsed-field pattern. Salmonella Enteritidis isolates from fecal droppings and internal organs also generated a single identical pulsed-field pattern. Interestingly, Salmonella Infantis was not isolated from any of the organs examined, while Salmonella Enteritidis was isolated from the spleen and liver of one roof rat. These results may indicate that wild roof rats could persistently carry Salmonella and contaminate commercial poultry facilities through intermittent fecal shedding. Moreover, Salmonella Enteritidis in wild roof rats appears to be more of a systemic infection, in which isolation is most likely to occur in internal organs, whereas Salmonella Infantis is more likely an enteric type of infection, in which isolation is most likely to occur in the intestinal contents. It is very plausible that layer chickens could become infected with Salmonella through ingestion of Salmonella-positive fecal droppings or feeds contaminated with these fecal droppings from infected resident roof rats. This is

Revaccination against Marek's disease is a widespread practice in some countries. The rationale of this practice is unknown, and there is no consensus in the protocols. Recently, we have demonstrated that administration of the first vaccine at 18 days of embryonation followed by a more protective second vaccine at hatch (18ED/1d) reproduced systematically the benefits of revaccination under laboratory conditions. Here, we have used the same model to optimize the revaccination protocols by using currently available vaccines and to determine whether two features associated with Marek's disease vaccine-induced protection (activation of T cells and replication of vaccine virus) are involved in the revaccination protocols. Protection conferred by three revaccination protocols (turkey herpesvirus [HVT] 18ED/HVT SB-1 1d, HVT 18ED/CVI988 1d, and HVT SB-1 18ED/CVI988 1d) was evaluated. Revaccination protocols also were compared with single vaccination protocols (HVT 18ED, HVT SB-1 18ED, HVT SB-1 1d, CVI988 18ED, and CVI988 1d). Our results demonstrated that it is possible to improve efficacy of the currently available vaccines by using them in revaccination programs. Administration of HVT 18ED/CVI988 1d and HVT SB-1 18ED/CVI988 1d were the two protocols that conferred the highest protection against a very early challenge (2 days of age) with very virulent plus Marek's disease virus strain 648A. In a separate experiment, we evaluated vaccine replication and activation of T cells in single and revaccination protocols. Our results demonstrated that replication of the second vaccine, although decreased compared with single vaccination, could be detected at 3 days (HVT, CVI988) or at 6 days (SB-1). Administration of the first vaccine (HVT) at 18ED resulted in a high percentage of activated T cells. Administration of a second vaccine (either HVT-SB-1 or CVI988) at 1d resulted in increased intensity of MHC-II stain in activated T cells.

Optimización de los protocolos de vacunación doble contra la enfermedad de Marek mediante el uso de vacunas comercialmente disponibles: Evaluación de la protección, replicación de la vacuna y activación de células T.

La revacunación contra la enfermedad de Marek es una práctica muy extendida en algunos países. La justificación de esta práctica es desconocida, y no hay un consenso en los protocolos. Recientemente, se demostró que la administración de la primera vacuna a los 18 días de desarrollo embrionario (DE) seguido por la aplicación de una segunda vacuna más protectora a la eclosión (18DE/1d), reproduce de manera sistemática los beneficios de la revacunación bajo condiciones de laboratorio. En este trabajo, se utilizó el mismo modelo para optimizar los protocolos de la revacunación con las vacunas actualmente disponibles y para determinar si dos aspectos asociados con protección inducida por la vacuna contra la enfermedad de Marek (la activación de las células T y la replicación de virus vacunal) están involucrados en los protocolos de la revacunación. La protección conferida por tres protocolos de la revacunación (virus herpes de pavo [HVT] a los18DE/HVT SB-1 al día 1; HVT 18DE/CVI988 al día 1; y HVT SB-1 18DE/CVI988 al día 1) se evaluaron. Los protocolos de revacunación también se compararon con los protocolos de vacunación individuales (HVT 18ED, HVT SB-1 18ED, HVT SB-1 día 1, CVI988 18ED, y CVI988 día 1). Los resultados observados demostraron que es posible mejorar la eficacia de las vacunas actualmente disponibles mediante su aplicación dentro de programas de revacunación. La administración de HVT 18ED/CVI988 día 1 y HVT SB-1 18ED/CVI988 día 1, fueron los dos protocolos que le confirieron la máxima protección contra a un desafío muy temprano (dos días de edad) con una cepa muy virulenta del virus de la enfermedad de Marek, la cepa 648A. En un experimento por separado, se evaluaron la replicación del virus vacunal y la activación d

Vaccines composed of either virulent or attenuated Eimeria spp. oocysts have been developed as an alternative to medication of feed with ionophore drugs or synthetic chemicals. The purpose of this study was to evaluate the use of gel-beads containing a mixture of Eimeria acervulina, Eimeria maxima, and Eimeria tenella oocysts as a vaccine against coccidiosis. Newly hatched chicks (Gallus gallus domesticus) were either sprayed with an aqueous suspension of Eimeria oocysts or were allowed to ingest feed containing Eimeria oocysts-incorporated gel-beads. Control day-old chicks were given an equivalent number of Eimeria oocysts (10⁴ total) by oral gavage. After 3 days, chicks were randomly assigned to individual cages, and feces were collected between days 5 and 8 postinfection. All samples were processed for total Eimeria oocysts. At 4 wk of age, all chickens and a control nonimmunized group received a high-dose E. acervulina, E. maxima, and E. tenella challenge infection. Oocyst excretion by chicks fed gel-beads or inoculated by oral gavage was 10- to 100-fold greater than that of chicks spray-vaccinated with the Eimeria oocysts mixture (log 6.3–6.6 vs. log 4.8). Subsequent protection against challenge as measured by weight gain and feed conversion efficiency was significantly greater (P < 0.05) in gel-bead and oral gavage groups compared with spray-vaccinated or nonimmunized groups. Also, gel-bead and oral gavage groups showed no significant difference (P > 0.05) in weight gain and feed conversion efficiency compared with nonchallenged controls. These findings indicate that incorporation of Eimeria spp. oocysts in gel-beads may represent an effective way to deliver live oocyst vaccines to day-old chicks for preventing subsequent outbreaks of coccidiosis in the field.

El método de aplicación basado en perlas de gel para ooquistes de Eimeria protege a pollos contra la coccidiosis.

Se han desarrollado vacunas compuestas de ooquistes tanto virulentos o atenuados de Eimeria spp., como una alternativa a la medicación de los alimentos con medicamentos ionóforos o con productos químicos sintéticos. El propósito de este estudio fue evaluar el uso de perlas de gel que contienen una mezcla de ooquistes de Eimeria acervulina, Eimeria maxima, y de Eimeria tenella como una vacuna contra la coccidiosis. Pollitos recién eclosionados (Gallus gallus domesticus) fueron sometidos a aerosoles ya sea con una suspensión acuosa de ooquistes de Eimeria o se les permitió ingerir un alimento que contenía ooquistes de Eimeria incorporados en perlas de gel. Se administro en los pollitos de un día de edad del grupo control un número equivalente de ooquistes de Eimeria (10⁴ en total) mediante una sonda oral. Después de tres días, los pollos fueron asignados de manera aleatoria a jaulas individuales, y las heces se recogieron entre los días cinco y ocho postinfección. Todas las muestras fueron procesadas para determinar conteos totales de ooquistes de Eimeria. A las cuatro semanas de edad, todos l

Recent reports have shown an increased recovery of cells from flocked nylon swabs which may improve the specimen quality and the real sensitivity of diagnostic tests in a clinical setting. In this study, the detection of Mycoplasma gallisepticum (MG) and M. synoviae (MS), using dry swabs of different materials (nylon flocked, cotton, and polyester), was investigated using real-time TaqMan® PCR protocols. Different types of samples, including dilutions of pure broth cultures of MG and MS as well as swabs from tracheas of experimentally infected chickens and field cases of infection, were analyzed. There were no statistical differences in real-time PCR results among the different swab types (P < 0.05), indicating that this is not likely to be a significant factor in MG and MS detection by this method.

Influencia de material del hisopo en la detección de Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma synoviae por PCR en tiempo real.

Informes recientes han demostrado un aumento de la recuperación de las células a partir de hisopos de nylon agrupados lo que puede mejorar la calidad de la muestra y la sensibilidad real de las pruebas de diagnóstico en un entorno clínico. En este estudio, se analizó la detección de Mycoplasma gallisepticum y de M. synoviae, utilizando hisopos secos de diferentes materiales (nylon agrupados, algodón y poliéster), y mediante un protocolo de PCR en tiempo real con la tecnología TaqMan®. Se analizaron los diferentes tipos de muestras, incluyendo las diluciones de cultivos puros en caldo de M. gallisepticum y de M. synoviae, así como hisopos de tráquea de pollos infectados experimentalmente y los casos de infecciones en el campo. No se observaron diferencias estadísticas en los resultados de PCR en tiempo real entre los diferentes tipos de hisopo (P < 0.05), indicando que no es probable que el tipo de material de hisopo sea un factor significativo en la detección de M. gallisepticum y de M. synoviae por este método.

A quantitative PCR (qPCR) assay using SYBR Green I was developed based on the published sequence of the gtxA gene from Gallibacterium anatis. This method produced reliable specificity, sensitivity, and repeatability. The detection rate of Gallibacterium in 181 clinical samples was 36.5% (66/181) by qPCR, which was superior to the detection rate of Gallibacterium-specific PCR (0/181) and an isolation and identification assay (18.2% or 33/181). No association was found between the prevalence of Gallibacterium and the age of the chickens. Gallibacterium infection was detected in one 4-day-old chicken, showing that infection can occur much earlier than the previously stated fourth week of life. Tissue sample analysis showed that Gallibacterium is mainly located in the trachea and ovaries, based on results from three groups of chicken with different health statuses. Furthermore, a titer analysis suggested that Gallibacterium loads in different organs may correlate with different clinical manifestations of disease. Thus, the qPCR assay developed in the present study is useful for identification and quantitative analysis of gtxA-containing Gallibacterium in various tissue samples from birds and for the assessment of the pathogenic mechanisms of Gallibacterium.

Desarrollo y aplicación preliminar de un ensayo cuantitativo de PCR para la detección en pollos de especies de Gallibacterium que contienen el gene gtxA en pollos.

Un ensayo de PCR cuantitativo (qPCR) utilizando SYBR Green I fue desarrollado con base en la secuencia publicada del gene gtxA de Gallibacterium anatis. Este método mostró una especificidad, sensibilidad y repetibilidad confiables. La tasa de detección de Gallibacterium en 181 muestras clínicas fue del 36.5% (66/181) mediante el ensayo qPCR, que fue superior a la tasa de detección mediante el método de PCR específico para Gallibacterium (0/181) y de un ensayo de aislamiento e identificación (18.2% o 33/181). No se encontró asociación entre la prevalencia de Gallibacterium y la edad de los pollos. La infección por Gallibacterium se detectó en un pollo de 4 días de edad, lo que mostró que la infección puede ocurrir mucho antes de la cuarta semana edad que era el tiempo de detección que se había establecido previamente. El análisis de muestras de tejidos mostró que el Gallibacterium se localiza principalmente en la tráquea y los ovarios, con base en los resultados de los tres grupos de pollos con diferentes condiciones de salud. Por otra parte, un análisis de títulos sugiere que las cargas de Gallibacterium en diferentes órganos pueden correlacionar con diferentes manifestaciones clínicas de la enfermedad. De esta manera, el ensayo qPCR desarrollado en el presente estudio es útil para la identificación y el análisis cuantitativo de cepas de Gallibacterium que contienen el gene gtxA en muestras de tejido diferentes de aves y también puede ser útil para la evaluación de los mecanismos patogénicos de Gallibacterium.

A virulent Riemerella anatipestifer bacteriophage, RAP44, belonging to the Siphoviridae family of tailed phages, was previously isolated from feces of healthy Muscovy ducks in China. A complete genomic sequence analysis indicates that the phage's genome consists of a linear, double-stranded DNA molecule of 49,329 nucleotides. Eighty open reading frames (ORF) were identified. Putative functions could be assigned to 24 of the ORFs. The location of these genes was consistent with organization of the genome in a modular format which includes modules for host cell lysis, tail morphogenesis, head morphogenesis, and DNA replication and modification modules. Until now, no R. anatipestifer phage genome sequence has been reported in the literature. Therefore, this study represents the first complete genomic and molecular description of the R. anatipestifer phage.

Secuencia genómica completa del bacteriófago virulento RAP44 de Riemerella anatipestifer.

Un bacteriófago virulento de Riemerella anatipestifer, RAP44, que pertenece a la familia Siphoviridae que incluye fagos con cola, fue aislado anteriormente de las heces de patos reales sanos en China. El análisis completo de la secuencia genómica indica que el genoma del fago consiste de una molécula de ADN lineal, de doble cadena de 49,329 nucleótidos. Ochenta marcos de lectura continuos (ORF) fueron identificados. Se pudieron asignar funciones supuestas a 24 de los ORFs. La ubicación de estos genes fue compatible con la organización del genoma en un formato modular que incluye módulos para la lisis de la célula huésped, para morfogénesis de la cola, y de la cabeza, y para la replicación y modificación del ADN. Hasta ahora, ninguna secuencia de un fago de R. anatipestifer se había reportado en la literatura. Por lo tanto, este estudio representa la primera descripción genómica y molecular completa de un fago de R. anatipestifer.

Marek's disease (MD) is a highly contagious viral disease of chickens (Gallus gallus domesticus) caused by MD virus (MDV), characterized by paralysis, neurologic signs, and the rapid onset of T-cell lymphomas. MDV-induced T-cell transformation requires a basic leucine zipper protein called Marek's EcoRI-Q–encoded protein (Meq). We have identified mutations in the coding sequence of Meq that correlated with virus pathotype (virulent, very virulent, and very virulent plus). The aim of this study was to determine whether recombinant viruses could be isolated based on Meq expression through in vivo selection. Chicken embryo fibroblasts (CEFs) were cotransfected with an rMd5 strain-based Meq deletion virus (rMd5ΔMeq) and meq loci from strains representing different pathotypes of MDV. Transfected CEFs were inoculated into chickens in two independent studies. We were able to isolate a single recombinant virus, rMDV-1137, in a contact-exposed chicken. rMDV-1137 had recombined two copies of the meq gene of RB-1B and was found to have pathogenicity similar to both RB-1B and rMd5 parental strains. We found the RB-1B– and rMd5-induced lymphomas showed differences in composition and that rMDV-1137–induced lymphomas were intermediate in their composition. We were able to establish cell lines from both RB-1B– (MDCC-UD35, -UD37) and rMDV-1137 (MDCC-UD36, -UD38)–induced, but not rMd5-induced, lymphomas. To date, no rMd5- or parent Md5-transformed T-cell lines have been reported. Our results suggest that 1) a recombinant MDV can be selected on the basis of oncogenicity; 2) changes in Meq sequence seem to affect tumor composition and the ability to establish cell lines; and 3) in addition to meq, other genomic loci affect MDV pathogenicity and oncogenicity.

Selección de un virus de la enfermedad de Marek recombinante in vivo a través de la expresión de la oncoproteína codificada por el gene EcoRI-Q (Meq) del virus de Marek: Caracterización de una mutante basada en el virus rMd5 que expresaba la proteína Meq de la cepa RB-1B.

La enfermedad de Marek (MD) es una enfermedad viral muy contagiosa de los pollos (Gallus gallus domesticus) causada por el virus de la enfermedad de Marek, que se caracteriza por parálisis, signos neurológicos, y la rápida aparición de los linfomas de células T. La transformación de células T inducida por el virus de Marek, requiere de proteína con una cremallera básica de leucina llamada proteína codificada por el segmento de Marek EcoRI-Q (Meq). Se han identificado mutaciones en la secuencia de codificación del gene Meq que se correlacionaron con el patotipo del virus (virulento, muy virulento, y muy virulento plus). El objetivo de este estudio fue determinar si los virus recombinantes pueden ser aislados con base en la expresión de Meq a través de selección in vivo. Se cotransfectaron fibroblastos de embrión de pollo con un virus basado en la cepa rMd5 que presentaba la deleción de Meq (rMd5ΔMeq) y con el loci de meq de cepas que representan a diferentes patotipos del virus de Marek. Los fibroblastos transfectados fueron inoculados en pollos en dos estudios independientes. Fue posible aislar un solo virus recombinante, rMDV-1137, en un pollo expuesto por contacto. El virus rMDV-1137 presentó dos copias recombinantes del gene meq del virus RB-1B y se encontró que tienen patogenicidad similar a ambos virus progenitores, RB-1B y rMd5. Se observó que los linfomas inducidos por RB-1B y por rMd5 mostraron diferencias en la composición y que los linfomas inducidos por rMDV-1137 fueron intermedios en su composición. Se pudieron establecer líneas celulares de ambos linfomas inducidos por los virus RB-1B-(MDCC-UD35, -UD37) y por el virus rMDV 1137 (MDCC-UD36, -UD38

Egyptian geese (Alopochen aegypticus), a duck species endemic to sub-Saharan Africa and occasionally implicated in the transmission of avian influenza viruses (AIV) to farmed ostriches, were experimentally infected with low pathogenicity H7N1 and H6N8 viruses to assess viral shedding and immune profiles. Following the first infection with H7N1 virus, high titers of virus were shed from both the tracheae and cloacae for at least 7 days postinfection, and tracheal shedding lasting until day 14. All detectable shedding from both tracheae and cloacae had ceased within 28 days of infection. Antibody titers peaked at day 7 postinfection, but the initial immune response was short-lived. Birds that received a second challenge with the homologous H7N1 virus mounted a more robust response that lasted beyond 66 days postchallenge, and H7N1 virus was detected, albeit at much lower levels, until day 28 post secondary infection (psi) in the cloaca and beyond day 28 psi in the trachea. Birds that received an initial infection with H7N1 virus were also challenged with H6N8 virus, and because a comparable shedding pattern to the H7N1 challenge group was observed, we concluded that the effect of any nonspecific immunity was negligible.

Respuesta de anticuerpos y perfil de eliminación viral de gansos egipcios (Alopochen aegyptiacus) infectados con virus de la influenza aviar de baja patogenicidad subtipos H7N1 y H6N8.

Gansos egipcios (Alopochen aegyptiacus), una especie de patos endémicos de África subsahariana y que en ocasiones se han asociado con la transmisión del virus de la influenza aviar a granjas de avestruces, fueron infectados experimentalmente con virus de influenza aviar de baja patogenicidad subtipos H7N1 y H6N8 para evaluar la diseminación viral y el perfil inmunológico. Después de la primera infección con el virus H7N1, se observó una eliminación de títulos virales altos a partir de dos tráqueas y cloacas por lo menos durante siete días post-infección, y la diseminación traqueal que duró hasta el día 14. La detección de eliminación tanto de tráqueas como de cloacas se terminó dentro de los 28 días de la infección. Los títulos de anticuerpos alcanzaron su punto máximo en el día siete después de la infección, pero la respuesta inmune inicial fue de corta duración. Las aves que recibieron un segundo desafío con el virus homólogo H7N1 establecieron una respuesta más robusta que se prolongó más allá de los 66 días después del desafío, y se detectó el virus H7N1, aunque con niveles mucho más bajos, hasta que 28 días después de la infección secundaria en la cloaca, y en la tráquea más allá del día 28 después de la infección secundaria. Las aves que recibieron una infección inicial con el virus H7N1 fueron desafiados también con el virus H6N8, y debido a que se observó un patrón de eliminación comparable a la del grupo desafiado con el subtipo H7N1, se concluyó que el efecto de cualquier mecanismo inmune inespecífico fue insignificante.

In order to generate Salmonella enterica serovar Enteritidis fimbriae antigens (rSEF21), the intact region encoding SEF21 was amplified from Salmonella Enteritidis by PCR and subcloned into a prokaryotic expression vector pET-28a( ) to yield pET-28a( )-SEF21. The rSEF21 protein was highly expressed and purified by nickel affinity chromatography. Liposome-associated rSEF21 was prepared for oral immunization to seek protective efficacy for intestinal infection with Salmonella Enteritidis. Evidence of IgA and IgG responses were found in the intestinal tracts and in the sera of a group of chickens immunized. Two weeks after the booster immunization, the chickens were challenged orally with 2 × 10⁶ colony-forming units of live Salmonella Enteritidis, and fecal samples were examined for bacterial excretion from the intestinal tract. Significantly less fecal excretion of bacteria was observed in immunized chickens for 4 wk after challenge. The numbers of bacteria in the intestinal contents (cecum and rectum) were also significantly lower in immunized chickens than in unimmunized controls. Therefore, oral immunization with liposome-associated rSEF21 elicits both systemic and mucosal antibody responses, leading to a reduction in bacterial colonization in the intestinal tract and excretion of Salmonella Enteritidis in the feces.

Respuesta inmune contra una proteína recombinante de Salmonella enterica serovar Enteritidis SEF21 asociada a liposomas, después de la inmunización oral en pollos.

Con el fin de generar antígenos fimbriales de Salmonella enterica serovar Enteritidis (rSEF21), se amplificó mediante PCR la región intacta de codificación SEF21 a partir de Salmonella Enteritidis y se subclonó en un vector de expresión procariótica pET-28a ( ) para producir pET-28a ( )-SEF21. La proteína rSEF21 fue altamente expresada y se purificó mediante cromatografía de afinidad con níquel. Se preparó la proteína rSEF21 asociada a liposomas para la inmunización oral para determinar la eficacia protectora contra la infección intestinal con Salmonella Enteritidis. Se encontró evidencia de las respuestas de IgA e IgG en los tractos intestinales y en los sueros de un grupo de pollos inmunizados. Dos semanas después de la inmunización de refuerzo, los pollos fueron desafiados oralmente con 2 × 10⁶ unidades formadoras de colonias de Salmonella Enteritidis viva, y las muestras de heces fueron examinadas para la excreción de bacterias en el tracto intestinal. Se observó una excreción fecal de bacterias significativamente menor en pollos vacunados durante cuatro semanas después del desafío. Los números de bacterias en los contenidos intestinales (el ciego y el recto) también fueron significativamente menores en los pollos inmunizados en comparación con los controles no vacunados. Por lo tanto, la inmunización oral con la proteína rSEF21 asociada con liposomas provoca respuestas de anticuerpos sistémicos y en las mucosas, dando lugar a una reducción de la colonización bacteriana en el tracto intestinal y a la excreción de Salmonella Enteritidis en las heces.

FliC, the flagellin antigen of Salmonella Enteritidis, was tested as a vaccine candidate for protective effect against a homologous challenge in chickens. After immunization with recombinant FliC (rFliC) or administration of phosphate-buffered saline (PBS) at 56 days old, the chickens were challenged with 10⁹ colony-forming units of Salmonella Enteritidis at 76 days old. The vaccinated birds showed significantly decreased bacterial counts in the liver and cecal contents compared to those administered PBS at 7 days postchallenge, but the protection was partial. The replication experiment also showed a similar result. In both experiments, vaccination induced an increased level of serum anti-rFliC IgG, which was also reactive to the native flagella. The intestinal IgA level was slightly higher in the vaccinated birds than in the control. However, neither the proliferative response nor interferon-γ secretion of splenic cells upon stimulation with rFliC was induced. Therefore, the effect of rFliC as a vaccine is limited, and further improvement is needed.

Eficacia de la proteína recombinante soluble FliC de Salmonella enterica serovar Enteritidis como un candidato potencial para una vacuna contra el desafío homólogo en pollos.

El antígeno de flagelina FliC de Salmonella Enteritidis, se puso a prueba como un candidato para vacuna en su efecto protector frente a un desafío homólogo en pollos. Después de la inmunización con FliC recombinante (rFliC) o la administración de solución amoriguada de fosfatos (PBS) a los 56 días de edad, los pollos fueron desafiados con 10⁹ unidades formadoras de colonias de Salmonella Enteritidis a los 76 días de edad. Las aves vacunadas mostraron una disminución significativa de los conteos bacterianos en el hígado y en los contenidos cecales en comparación con las aves a las que se les administró PBS a los siete días después del desafío, pero la protección fue parcial. El experimento de replicación también mostró un resultado similar. En ambos experimentos, la vacunación indujo un aumento de IgG anti-rFliC en el suero, que era también reactiva a los flagelos nativos. El nivel de IgA intestinal fue ligeramente mayor en las aves vacunadas en comparación con las aves del grupo control. Sin embargo, ni la respuesta proliferativa, ni la secreción de γ-interferón por las células del bazo en respuesta a la estimulación con rFliC fue inducida. Por lo tanto, el efecto de la proteína rFliC como una vacuna es limitada, y se requiere de un perfeccionamiento posterior.

Avibacterium paragallinarum causes infectious coryza in chickens, an acute respiratory disease that has worldwide economic significance. The objectives of this study were to determine the serovars, antimicrobial resistance, and pathogenicity of A. paragallinarum isolated from chickens in Thailand. Eighteen field isolates of A. paragallinarum were confirmed by PCR. When examined by serotyping in a hemagglutination inhibition test, 10 isolates were serovar A, five isolates were serovar B, and three isolates were serovar C. The susceptibility of the isolates to 16 antimicrobial agents was tested by a disk diffusion method. All isolates were susceptible to amoxicillin–clavulanic acid. There was a high level of resistance to lincomycin and erythromycin. All isolates were resistant to cloxacillin and neomycin. A study of bacterial entry into, and survival within, chicken macrophages showed variation between isolates but no clear connection to serovar. A virulence test was performed by challenging 4-wk-old layers via the nasal route with 400 µl of bacteria (10⁸ colony-forming units/ml). Clinical signs were observed daily for 7 days, and the birds were subjected to a postmortem necropsy at 7 days postchallenge. All 18 field isolates caused the typical clinical signs of infectious coryza and could be re-isolated at 7 days after challenge. There was no significant difference in the clinical scores of the isolates except that two isolates (112179 and 102984, serovars A and B, respectively) gave a significantly higher score than did isolate CMU1009 (a serovar A isolate). No correlation between serovar and severity of clinical signs was found.

Identificación de serovariedades, sensibilidad a los antibióticos y virulencia de aislamientos de Avibacterium paragallinarum de pollos en Tailandia.

Avibacterium paragallinarum produce coriza infecciosa en los pollos, que es una enfermedad respiratoria aguda que tiene una importancia económica a nivel mundial. Los objetivos de este estudio fueron determinar las serovariedades, la resistencia antimicrobiana y la patogenicidad de A. paragallinarum aislados de pollos en Tailandia. Dieciocho aislamientos de campo de A. paragallinarum fueron confirmados por PCR. Cuando se examinaron mediante serotipificación con una prueba de inhibición de la hemaglutinación, diez aislamientos se clasificaron como serovariedad A, cinco aislamientos como serovariedad B, y tres aislamientos como serovariedad C. La susceptibilidad de los aislamientos a 16 agentes antimicrobianos se puso a prueba mediante un método de difusión en disco. Todos los aislados fueron sensibles a amoxicilina-ácido clavulánico. Se observó un alto nivel de resistencia a la lincomicina y a la eritromicina. Todos los aislados fueron resistentes a la cloxacilina y a la neomicina. Un estudio de fagocitosis y de supervivencia bacteriana en el interior de macrófagos, mostró variación entre los aislamientos, pero no se observó ninguna conexión clara con la serovariedad. Se realizó una prueba de virulencia mediante el desafío de pollas de una estirpe productora de huevo, de cuatro semanas de edad a través de la vía nasal con 400 µl de bacterias (10⁸ unidades formadoras de colonias / ml). Los signos clínicos se observaron diariamente durante siete días, y las aves fueron sometidas a una necropsia a los siete días después del desafío. Todos los 18 aislamientos de campo causaron los signos clínicos típicos de coriza infecciosa y esta pudo ser reaislada a los siete días después del desafío. No hubo diferencias significativas en las puntuaciones clínicas de los aislamientos, excepto que dos cepas (112

During a field study in 2010 the daily growth, feed conversion, first-week mortality, broiler loss due to mortality and slaughterhouse condemnation, and production index were monitored in 100 broiler flocks derived from four breeder farms vaccinated with Nobilis OR inac and four Ornithobacterium rhinotracheale–unvaccinated breeder farms of the same organization in Belgium. Other parameters related to the broiler flocks, such as flock size, season, age of the breeders, and corresponding breeder farms, were also noted. All gathered data were examined with ANOVA, linear correlation, and linear regression analyses. Results demonstrated a significant 22.3% lower broiler loss and a significant 3.9% higher production index in the broiler flocks derived from breeders vaccinated with Nobilis OR inac. These results confirm field observations obtained in 1999, thereby providing further evidence for an effect of O. rhinotracheale vaccination in breeders with regard to the improved performance of broilers.

Mejora del rendimiento del pollo de engorde asociado con la vacunación contra Ornithobacterium rhinotracheale en aves reproductoras.

Durante un estudio de campo en el año 2010, se analizaron el crecimiento diario, la conversión alimenticia, la mortalidad a la primera semana, la pérdida de pollos por mortalidad, los decomisos en la planta de procesamiento, y el índice de la producción, en 100 lotes de pollos de engorde procedentes de cuatro granjas de reproductoras inmunizadas con la vacuna Nobilis OR inac. y en cuatro granjas de reproductores no vacunadas contra Ornithobacterium rhinotracheale de la misma compañía en Bélgica. Otros parámetros relacionados con las parvadas de pollos de engorde, tales como el tamaño de la parvada, la estación, la edad de las reproductoras y las granjas de reproductoras correspondientes, también fueron registrados. Todos los datos obtenidos se analizaron mediante los métodos de análisis de varianza, correlación lineal y análisis de regresión lineal. Los resultados demostraron una pérdida significativamente menor en un 22.3% y un índice de producción significativamente mayor en un 3.9% en las parvadas de pollos procedentes de reproductoras vacunadas con Nobilis OR inac. Estos resultados confirman las observaciones de campo obtenidas en el año 1999, proporcionando mayor evidencia del efecto de la vacunación contra O. rhinotracheale en reproductoras relacionado con la mejora del rendimiento de pollos de engorde.

A two-step SYBR-Green I–based real-time PCR with melting curve analysis was developed to detect and differentiate the avian reovirus (ARV) σC gene in field and vaccine ARVs. Three primer sets were used to amplify the σC gene from its 5′, center, and 3′ regions and analyze the melting point temperatures of nine ARVs. By combining the melting curves of the three ARV σC gene regions, melting curve analysis could accurately distinguish the ARVs of different subtypes, and the results were consistent with phylogenetic analysis. The ARV σC gene polymorphisms from different strains were also used to explain the differences in melting point temperatures. Compared with traditional subtyping methods, the current melting curve analysis provided an accurate test for separating ARVs, thereby making it a useful method for the improved selection of ARV vaccines.

Detección y diferenciación de reovirus aviares utilizando un método de transcripción reversa y PCR en tiempo real en dos pasos con análisis de la curva de fusión utilizando SYBR-Green I.

Se desarrolló un método de PCR en tiempo real en dos pasos basado en el análisis de las curvas de fusión con SYBR-Green I para detectar y diferenciar reovirus aviares mediante el gene sigma C de cepas de campo y de vacunas. Se utilizaron tres pares de iniciadores para amplificar el gene Sigma C desde las regiones del extremo 5′, el centro y el extremo 3′ y se analizaron las temperaturas de punto de fusión de nueve reovirus aviares. Mediante el análisis combinado de las curvas de fusión de las tres regiones del gene sigma C, el análisis de la curva de fusión pudo distinguir con precisión los diferentes subtipos de reovirus aviares, y los resultados fueron confirmados mediante el análisis filogenético. Los polimorfismos del gene C de diferentes cepas también fueron utilizados para explicar las diferencias en las temperaturas de punto de fusión. En comparación con los métodos tradicionales de subtipificación, este análisis de la curva de fusión, resultó ser una prueba exacta para clasificar los reovirus aviares, por lo tanto resultó ser un método útil para la selección más adecuadas vacunas contra reovirus aviares.

A study was conducted to assess the diagnostic sensitivity and specificity of a disease surveillance method for diagnosis of highly pathogenic avian influenza (HPAI) outbreaks in household chicken flocks used by participatory disease surveillance (PDS) teams in Yogyakarta Province, Indonesia. The Government of Indonesia, in partnership with the Food and Agriculture Organization of the United Nations, has implemented a PDS method for the detection of HPAI outbreaks in poultry since 2006. The PDS method in Indonesia utilizes both a clinical case definition (CD) and the result of a commercial rapid antigen test kit Yogyakarta 55611, to diagnose HPAI outbreaks, primarily in backyard chicken flocks. The following diagnostic sensitivities and specificities were obtained relative to real-time reverse transcription-PCR as the gold standard diagnostic test: 1) 89% sensitivity (CI₉₅: 75%–97%) and 96% specificity (CI₉₅: 89%–99%) for the PDS CD alone; 2) 86% sensitivity (CI₉₅: 71%–95%) and 99% specificity (CI₉₅: 94%–100%) for the rapid antigen test alone; and 3) 84% sensitivity (CI₉₅: 68%–94%) and 100% specificity (CI₉₅: 96%–100%) for the PDS CD result combined with the rapid antigen test result. Based on these results, HPAI outbreaks in extensively raised household chickens can be diagnosed with sufficient sensitivity and specificity using the PDS method as implemented in Indonesia. Subject to further field evaluation, data from this study suggest that the diagnostic sensitivity of the PDS method may be improved by expanding the PDS CD to include more possible clinical presentations of HPAI and by increasing the number of rapid antigen tests to three different birds with HPAI-compatible signs of same flock.

Sensibilidad y especificidad diagnósticas de un método participativo de vigilancia para la influenza aviar altamente patógena en pollos domésticos en Indonesia.

Se realizó un estudio para evaluar la sensibilidad y especificidad diagnóstica de un método de vigilancia de enfermedades para el diagnóstico de influenza aviar altamente patógena, los brotes en pollos domésticos utilizados por los equipos participativos para la vigilancia de enfermedades en la provincia de Yogyakarta, Indonesia. El Gobierno de Indonesia, en colaboración con la Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura, ha puesto en marcha un método de equipos participativos de vigilancia para la detección de los brotes de influenza aviar altamente patógena en la avicultura desde 2006. El método participativo de vigilancia para enfermedades en Indonesia utiliza tanto una definición de caso clínico (EC) y el resultado de un estuche comercial para la detección rápida del antígeno Yogyakarta 55611, para el diagnóstico de los brotes de la influenza aviar de alta patogenicidad, sobre todo en las parvadas de aves de traspatio. Las siguientes sensibilidades y especificidades diagnósticas se determinaron con relación con el método de transcripción reversa y PCR en tiempo real como prueba diagnóstica de referencia: 1) sensibilidad de 89% con un intervalo de confianza al 95% (IC₉₅) de 75%–97% y una especificidad del 96% (IC₉₅: 89%–99%) para las definiciones de casos por el método participativo de vigilancia únicamente, 2) para la prueba rápida de detección de antígeno únicamente se observó una sensibilidad del 86% (IC₉₅: 71%–95%) y una especificidad del 99% (IC₉₅: 94%–100%), y 3) para la combinación de la definición de casos por el método participativo de vigilancia y la prueba de detección del antígeno, se observó una sensibilidad del 84% (IC₉₅: 68%–94%) y una especificidad del 100% (IC₉₅: 96%–100%). Con base en estos resultados, los brotes de influenza aviar de alta patogenicidad en pollos domésticos criados de forma extensiva pueden ser diagnosticados con la suf

This study investigated the delivery of an aerosol of monodisperse microspheres to the respiratory tract of birds following aerosol exposure. Adult domestic pigeons (Columbia livia domestica, n  =  5 birds per timed treatment) were exposed to an aerosol of fluorescent 1.0-µm diameter carboxylate microspheres for 0.5, 1, 2, or 4 hr. During the aerosolization period, the birds were free-standing in a plexiglass treatment chamber and the aerosol was delivered using a commercial nebulizer. Immediately following aerosol exposure, the birds were euthanatized and the carcasses were intravenously infused with a modified paraformaldehyde/gluteraldehyde fixative. Evaluation of microsphere distribution was performed using a stereoscopic microscope with an epifluorescent module. The results from this study revealed that the amount of aerosolized particles delivered using a commercial nebulizer was proportional to exposure periods. Aerosol exposure periods of 0.5 hr or 1 hr did not result in a readily observable distribution of 1.0 µm fluorescent microspheres to the cranial thoracic, caudal thoracic, or abdominal air sac membranes. This was partly attributed to the relatively low concentration of the individual monodisperse microspheres in the aerosolized suspension. The 2- and 4-hr exposure periods resulted in readily observable deposition of the 1.0 µm fluorescent microspheres in the cranial thoracic, caudal thoracic, or abdominal air sac membranes, with the 4-hr exposure period resulting in the greatest number of particles on the membrane surfaces. For each of the exposure periods, there was individual animal variation regarding the distribution and relative number of spheres deposited. This study demonstrates the widespread deposition of particles that had an aerodynamic equivalent diameter of approximately 1 µm and provides a better understanding of particle deposition efficiency within the respiratory system following aerosol exposure in birds.

Estudio de la aplicación por nebulización en aerosol de microesferas fluorescentes en el tracto respiratorio de las aves.

En este estudio se investigó la entrega de un aerosol de microesferas monodispersas en el tracto respiratorio de las aves después de la exposición a un aerosol. Palomas domésticas adultas (Columba livia domestica, n  =  5 aves por tiempo de tratamiento) fueron expuestos a un aerosol de microesferas de carboxilato fluorescentes de un diámetro de una 1.0 micra por diferentes tiempos de exposición: 30 minutos, una hora, dos horas, o cuatro horas. Durante el período de aerosolización, las aves se alojaron en una cámara de tratamientos de plexiglass y el aerosol se entregó mediante un nebulizador comercial. Inmediatamente después de la exposición a los aerosoles, se practicó la eutanasia de las aves y los cadáveres fueron infundidos por vía intravenosa con una solución fijadora modificada de paraformaldehído/glutaraldehído. La evaluación de la distribución de microesferas se realizó utilizando un microscopio estereoscópico con un módulo de epifluorescencia. Los resultados de este estudio revelaron que la cantidad de partículas de aerosol administradas utilizando un nebulizador comercial era proporcional a los periodos de exposición. Los períodos de exposición a los aerosoles de 30 minutos o de una hora no proporcionaron una distribución fácilmente observable de las microesferas fluorescentes de 1.0 micra en las membranas de los sacos aéreos torácicos craneales, torácicos caudales, o abdominales. Esto se atribuyó en parte a la concentración relativamente baja de microesferas monodispersas individuales en la suspensión de aerosol. Los periodos de dos y cuatro horas de exposición dieron lugar a la deposición fácilmente observable de las microesferas fluorescentes en las membranas de los sacos aéreos torácicos craneales, torácicos caudales

The current U.S. Department of Agriculture (USDA)–validated real-time reverse transcription–polymerase chain reaction (rRT-PCR) assay designed to detect the matrix gene of avian paramyxovirus serotype-1 (APMV-1) is the primary screening assay used in the United States. It has previously been shown to be unable to consistently detect all members of class I APMV-1. Diagnostic testing relies on rRT-PCR to quickly detect APMV-1 in wild birds, backyard flocks, live bird markets, commercial poultry, and for export testing. Limitations of the current USDA assay have raised concerns about the potential for some strains of APMV-1 to remain undetected by the primary screening assay. Mismatches in the probe were shown to cause a loss in template binding efficiency, resulting in lack of detection by the assay. Here, we describe the development and analytical validation of a new rRT-PCR assay designed to target a highly conserved region of the matrix gene across a wide range of APMV-1 strains. Limit of detection testing revealed a 3 log₁₀ decrease in sensitivity for one low-virulence strain when compared to the USDA validated assay. Conversely, the assay showed increased sensitivity for a class I isolate and two virulent strains of APMV-1 that were not detected by the USDA-validated assay. The new assay also demonstrated a high degree of specificity by the lack of detection of 43 non–APMV-1 viruses.

Ensayo de rRT-PCR para detectar el gene de la matriz de una amplia gama de cepas de paramixovirus aviares serotipo I.

El Departamento de Agricultura de los Estados Unidos (USDA), validó un método de transcripción reversa y reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (rRT-PCR) que fue diseñado para detectar el gene de la matriz de los paramixovirus aviares serotipo 1 (APMV-1) el cual es la prueba de detección primaria utilizada en los Estados Unidos. Previamente, se ha demostrado que este método es incapaz de detectar de forma consistente a todos los miembros de la clase I de los APMV-1. Las pruebas de diagnóstico se basan en la rRT-PCR para detectar rápidamente la presencia de APMV-1 en las aves silvestres, aves de traspatio, en los mercados de aves vivas, en la avicultura comercial, y en las pruebas requeridas para la exportación. Las limitaciones del ensayo actual del USDA han generado interés por la posibilidad de que algunas cepas del APMV-1 puedan permanecer sin ser detectadas por el ensayo de diagnóstico primario. Se demostró que algunas disparidades en la sonda causaron una disminución en la eficiencia en la hibridación a la secuencia de ADN blanco, lo que resulta en una disminución en la detección mediante dicho ensayo. A continuación, se describe el desarrollo y la validación analítica de un nuevo método de rRT-PCR que fue diseñado para tener como blanco a una región altamente conservada del gene de la matriz de una amplia gama de cepas de APMV-1. El límite de detección de la prueba mostró una disminución de 3 log₁₀ de la sensibilidad para detectar una cepa de baja virulencia en comparación con el ensayo validado por el USDA. Sin embargo, este nuevo ensayo mostró una mayor sensibilidad para detectar un aislamiento Clase I y dos cepas virulentas de APMV-1 que no fueron detectados por el ensayo validado por el USDA. El nuevo ensayo también demostró un alto grado de especificidad porque no detectó 43 virus distintos al APMV-1.

Commercially available attenuated strains of Mycoplasma gallisepticum (MG) are commonly used within the layer industry to control MG-induced mycoplasmosis. Among these are two live MG vaccines derived from the moderately pathogenic MG “chick F” strain. In the present study, the commercially available F strain derivatives were compared for their ability to elicit seroconversion, persist in vivo, and protect against virulent MG-induced airsacculitis. In addition, a noncommercial laboratory–derived high-passage F strain isolate was included in the study. Commercial (Hy-Line W-36) layers were placed in biological isolation units at 9 wk of age (woa). At 10 woa, birds within each biological isolation unit were treated via eye-drop application with one of the three F strain–derived vaccines at one of four levels (1×, 10⁻¹×, 10⁻²×, or 10⁻³×). For the commercially available F strain derivatives, 1× equaled the manufacturer's recommended dose. The 1× dose of the noncommercial laboratory–maintained F strain derivative equaled 20 µl of a 48 hr culture. For wk 1–6 postvaccination (p.v.), sera were collected weekly from each bird, and seroconversion was assessed via serum plate agglutination (SPA). Virulent MG (strain R_low) challenge occurred via intratracheal inoculation at 7 wk p.v. Necropsies were subsequently performed to assess challenge-associated airsacculitus. For each F strain derivative applied at 1× and 10⁻¹×, 100% seroconversion, as measured by SPA, was demonstrated by 6 wk p.v., and rates at the 10⁻²× dosage were 10% and 90% for the commercial vaccines and 60% for the laboratory-derived strain in this period. Following challenge, airsacculitis was observed in 66.67% of the nontreated controls but not in any 1×- or 10⁻¹×-treated bird independent of applied F strain derivative.

Estudio comparativo de vacunas vivas atenuadas derivadas de la cepa F de Mycoplasma gallisepticum.

Cepas atenuadas de Mycoplasma gallisepticum disponibles en el mercado se utilizan comúnmente en la industria de gallinas de postura para controlar la micoplasmosis inducida por M. gallisepticum. Entre ellas se encuentran dos vacunas vivas de M. gallisepticum derivadas de la cepa moderadamente patógena “chick F” de M. gallisepticum. En el presente estudio, las cepas derivadas de la cepa F disponibles en el mercado se compararon por su capacidad para estimular la seroconversión, por su persistencia in vivo, y en la protección conferida contra la aerosaculitis inducida por M. gallisepticum virulento. Además, una cepa F no comercial de laboratorio y derivada de un aislamiento con alto pasaje se incluyó en el este estudio. Aves de postura comerciales (Hy-Line W-36) fueron colocados en unidades de aislamiento biológico a las 9 semanas de edad. A las diez semanas de edad, las aves dentro de cada unidad de aislamiento biológico fueron inoculadas a través de la aplicación de gotas oculares con una de las tres vacunas derivadas de la cepa F en uno de los cuatro niveles (1×, 10⁻¹×, 10⁻²×, ó 10⁻³×). Para los derivados de la cepa F disponibles en el mercado, 1x fue igual a la dosis recomendada por el fabricante. La dosis 1x de la cepa F de laboratorio no comercial fue igual a 20 µl de un cultivo de 48 horas. Durante seis semanas después de la vacunación, los sueros fueron recolectados semanalmente de cada ave, y se evaluó la seroconversión a partir de las muestras de suero a través de aglutinación en placa. Se realizó un desafío virulento (cepa R_low) a través de la inoculación intr

The effects against avian coccidiosis of two novel adjuvants, Quil A/cholesterol/dimethyl dioctadecyl ammonium bromide/Carbopol (QCDC) and QCDC/Bay R1005 (R)/cytosine-phosphate-guanosine (CpG) oligodeoxynucleotides (CpG ODN [T]) (QCDCRT) emulsified with profilin, a conserved Eimeria recombinant protein, were determined in broiler chickens. Chickens were subcutaneously immunized with isotonic saline (control group), profilin (P), profilin emulsified with QCDC (P-Q), or profilin with QCDCRT (P-QR) at 2 and 9 days post-hatch and orally challenged with 1.0 × 10⁴ sporulated oocysts of Eimeria acervulina (EA) at 7 days postimmunization. All profilin-immunized groups showed increased body weight gain when compared to the control group, and the P-QR group had significantly higher body weight gain than did those of the P and P-Q groups following EA challenge infection. All groups immunized with profilin showed significantly decreased intestinal lesions compared with the control group, with the P-QR group showing the lowest intestinal lesions among the profilin-treated groups. Finally, the P-QR group showed greater CD4 /CD8 and TCR1 /TCR2 splenocytes and higher antiprofilin serum antibody titers compared with the P and P-Q (or both) groups following EA challenge infection. These results further suggest that vaccination of chickens with profilin, in combination with the QCDCRT adjuvant, may provide a novel control strategy against EA infection in commercial flocks.

Nota de Investigación—Evaluación del efecto de un nuevo complejo de adyuvantes con base en profilina de Eimeria sobre las respuestas inmunes intestinales del hospedero contra E. acervulina viva.

Se determinaron en pollos de engorde los efectos contra la coccidiosis aviar los efectos de dos nuevos adyuvantes, Quil A / colesterol / bromuro de dimetil dioctadecil amonio / Carbopol (QCDC) y de QCDC / Bay R1005 (R) / oligodesoxinucleótidos de citosina-guanosina fosfato (CpG) (CpG ODN [T]) (QCDCRT) emulsionados con profilina, una proteína recombinante conservada de Eimeria. Los pollos fueron inmunizados por vía subcutánea con solución salina isotónica (control), con profilina (P), con profilina emulsionada con QCDC (P-Q) o con profilina y QCDCRT (P-QR) a los 2 y 9 días después de la eclosión y que se desafiaron oralmente con 1.0 × 10⁴ de ooquistes esporulados de Eimeria acervulina (EA) a los 7 días después de la inmunización. Todos los grupos inmunizados con profilina mostraron mayor ganancia de peso corporal en comparación con el grupo control, y el grupo que se sometió al tratamiento P-QR tratados con CpG tuvo una ganancia de peso mayor en comparación con los grupos P y PQ después de la infección por desafío con E. acervulina. Todos los grupos inmunizados con profilina mostraron una disminución significativa de las lesiones intestinales en comparación con el grupo control, con el grupo de P-QR y mostraron los grados de lesiones intestinales más bajos entre los grupos tratados con profilina. Finalmente, el grupo P-QR mostró los valores mayores de esplenocitos CD4 /CD8 y TCR1 /TCR2 y el aumento de los títulos de anticuerpos séricos contra la profilina en comparación con los grupos P y PQ (o ambos) después de la infección por desafío con E. acervulina. Estos resultados sugieren que la vacunación de pollos con la profilina, en combinación con el adyuvante QCDCRT, puede proporcionar una nueva estrategia de control contra la infección por E. acervulina en las parvadas

Infectious laryngotracheitis is a highly contagious respiratory disease of chickens controlled by biosecurity and vaccination with live attenuated or recombinant vaccines. Infectious laryngotracheitis virus (ILTV) infections are characterized by a peak of viral replication in the trachea followed by a steady decrease in replication that results in the establishment of latency. Estimation of viral load is an important tool to determine the stage of ILTV infection. Here, a multiplex real-time PCR was optimized for the quantification of ILTV genomes. Quantification of viral genomes was based on the amplification of the ILTV UL44 gene, and sample variability was normalized using the chicken (Gallus gallus domesticus) α2-collagen gene as an endogenous control in a duplex reaction.

Nota de Investigación—Optimización de un método dúplex de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real para la cuantificación relativa del virus de la laringotraqueítis infecciosa.

Laringotraqueítis infecciosa es una enfermedad respiratoria altamente contagiosa de los pollos, que se controla por la bioseguridad y la vacunación con vacunas vivas atenuadas o recombinantes. Las infecciones por el virus de la laringotraqueítis infecciosa se caracterizan por un pico de la replicación viral en la tráquea seguido por una constante disminución en la replicación que resulta en el establecimiento de la etapa de latencia. La estimación de la carga viral es una herramienta importante para determinar la etapa de la infección por el virus de la laringotraqueítis infecciosa. En este estudio se optimizó un método tipo múltiplex de la PCR en tiempo real para la cuantificación de genomas de dicho virus. La cuantificación de los genomas virales se basó en la amplificación del gene UL44 y la variabilidad de la muestra se normalizó utilizando el gene de la colágena α2 del pollo (Gallus gallus domesticus) como un control endógeno en una reacción dúplex.

Serum or plasma samples from raptors that prey or scavenge upon aquatic birds were tested by a commercially available blocking enzyme-linked immunosorbent assay for the evidence of antibodies to influenza A virus. Samples were taken from birds (n  =  616) admitted to two rehabilitation centers in the United States. In addition, samples from 472 migrating peregrine falcons (Falco peregrinus) trapped on autumnal and vernal migrations for banding purposes were also tested. Only bald eagles were notably seropositive (22/406). One each of peregrine falcon, great horned owl (Bubo virginianus), and Cooper's hawk (Accipiter cooperi) from a total of 472, 81, and 100, respectively, were also positive. None of the turkey vultures (n  =  21) or black vultures (n  =  8) was positive. No clinical signs referable to avian influenza were seen in any bird at the time of capture. These data indicate that, among raptors, bald eagles do have exposure to influenza A viruses.

Nota de Investigación—La evidencia serológica de exposición de aves rapaces al virus de la influenza.

Las muestras de suero o de plasma de aves rapaces o de rapiña que se alimentan de aves acuáticas vivas o muertas y de aves fueron analizadas mediante un ensayo de inmunoabsorción con enzimas ligadas de tipo competitivo para detectar la presencia de anticuerpos contra el virus de la influenza A. Se tomaron muestras de las aves (n  =  616) que fueron ingresadas a dos centros de rehabilitación en los Estados Unidos. Además, también se analizaron las muestras de 472 halcones peregrinos (Falco peregrinus) migratorios que fueron atrapados durante las migraciones de otoño y de primavera con el propósito de identificación mediante la colocación de bandas. Sólo las águilas calvas fueron notablemente seropositivas (22/406). También se encontró un individuo positivo de los halcones peregrinos, de los búhos cornudos (Bubo virginianus) y de los gavilanes de Cooper (Accipiter cooperi) de un total de 472, 81, y 100 aves, respectivamente. Ninguno de los buitres de cabeza roja (n  =  21) o de los buitres negros (n  =  8) fueron positivos. No se observaron signos clínicos atribuibles a la influenza aviar en todas las aves al momento de la captura. Estos datos indican que de entre las aves rapaces, las águilas calvas pueden ser infectadas por virus de la influenza A.

Proventricular dilatation disease (PDD) is a fatal, progressive neurological disorder of psittacine birds, which is caused by a single-stranded RNA virus, the avian bornavirus (ABV). The disease pattern includes lymphoplasmacytic inflammation of the central, peripheral and autonomic nervous system. Seven avian bornavirus genotypes have been identified during the last years. So far only monoinfections with a single genotype of ABV have been attributed to PDD cases. However, after a recent survey discovered a case of a double infection with two different ABV genotypes, this seemed to indicate the need for a more systematic search for mixed infections. Brain specimens from 21 psittacine birds affected with PDD were examined. Aim of the investigation was to generate partial ABV sequences of a part of the matrix protein (M) gene and to evaluate whether sequences of more than one ABV genotype were present. RNA was extracted, and subjected to reverse transcriptase PCR with primer pairs generating a partial sequence of the matrix protein (M) gene, followed by a cloning procedure. Ten clones per case were sequenced in order to elucidate whether sequences characteristic for one or more than one genotype were present. In 19 of 21 cases clear M gene sequences could be generated; in two cases nucleic acid amplification failed. Seven birds were infected with ABV 2 and nine with ABV 4, representing the predominant genotypes in Europe. Two cases showed a mixed infection with ABV 2 and ABV 4, and one case a mixed infection with ABV 2 and ABV 6. These results suggest that the molecular cloning method is a useful tool for distinguishing between single and multiple infection events by different ABV genotypes.

Nota de Investigación—Identificación de infecciones mixtas con diferentes genotipos de bornavirus aviares en aves psitácidas con la enfermedad de dilatación proventricular.

La enfermedad de dilatación del proventrículo es un trastorno fatal, neurológico progresivo de las aves psitácidas, que es causada por un virus ARN de cadena simple, el bornavirus aviar. El patrón de la enfermedad incluye la inflamación linfoplasmocitaria del sistema nervioso autónomo central y periférico. Siete genotipos de bornavirus aviar se han identificado en los últimos años. Hasta el momento sólo las infecciones con un solo genotipo del bornavirus aviar se han observado en los casos de enfermedad de dilatación del proventrículo. Sin embargo, después de un estudio reciente se observó un caso de una infección doble con dos genotipos de bornavirus diferentes, por lo tanto parece ser necesaria una búsqueda más sistemática para detectar infecciones mixtas. Se examinaron las muestras cerebrales de 21 psitácidos afectados con dilatación del proventrículo. El objetivo de la investigación fue generar secuencias parciales del gene de la proteína matriz (M) de bornavirus aviares y para determinar si las secuencias de más de un genotipo de bornavirus estaban presentes. Se extrajo el ARN y se sometió a una transcripción reversa y PCR (RT-PCR) con pares de iniciadores que incluían parcialmente la secuencia del gene M, seguido por un procedimiento de clonación. Se secuenciaron diez clones por caso con el fin de dilucidar si las secuencias características para uno o más genotipos estaban presentes. En 19 de los 21 casos se generaron secuencias claras del gene M, en dos casos falló la amplificación de ácidos nucleicos. Siete aves fueron infectadas con el bornavirus número dos y nueve con el bornavirus 4, que representan a los genotipos predominantes en Europa. En dos casos se observó una infección mixta con bornavirus aviar 2 y 4, y un caso tenía una infección mixta con bornavirus 2 y 6. Estos resultados sugieren que el método de clonación molecular es una herramienta útil para distinguir entre eventos de infección simples o múltiples por los genotipos de bornavirus aviar.

Recently, in some Brazilian poultry companies, a dorsal cranial muscular lesion has been increasingly detected in broilers, causing heavy economic losses due to carcass downgrading. The observed gross lesions located in the anterior latissimus dorsi (ALD) muscle are characterized by yellowish discoloration of the skin and swelling on the dorsal cranial region of that muscle. When the ALD muscle is cut, subcutaneous edema, muscular superficial hemorrhage, pallor, adherence, and increased thickness and density are observed. Microscopically, findings indicate degenerative and polyphasic features, variation in fiber size and splitting, presence of hyaline, necrotic and regenerative myofibers, extensive fibrosis, and adipose tissue with lymphohistiocytic infiltration in all ALD muscles affected. The etiology of the lesion is unknown, and no detailed report was found in literature. The highest frequency of carcass downgrading due to this lesion was found in the heaviest and the oldest males of high-yield broiler strains (P < 0.01). This study is the first to describe the pathologic and some epidemiologic aspects of this new myopathy.

Reporte de Caso—Disminución de la calidad de canales de pollos de engorde debida a una degeneración del músculo dorsal ancho (Latissimus Dorsi) anterior: Estudios patológicos y epidemiológicos.

Recientemente, en algunas empresas avícolas brasileñas, se ha detectado cada vez más una lesión muscular dorso craneal en pollos de engorde, que ha causando grandes pérdidas económicas debido a la disminución de la calidad de la canal. Las lesiones macroscópicas observadas localizadas en el músculo dorsal ancho anterior (ALD), los músculos se caracterizan por una coloración amarillenta de la piel y abultamiento de la región dorsal craneal del músculo. Cuando se realiza una incisión sobre el músculo dorsal ancho anterior, se observan edema subcutáneo, hemorragias musculares superficiales, palidez, adherencias, aumento del espesor y de la densidad. Microscópicamente, los hallazgos indican características degenerativas y polifásicas, variación en el tamaño de las fibras con segmentación, presencia de material hialino, fibras musculares necróticas y en regeneración, fibrosis extensa, e infiltración de tejido adiposo con infiltrados linfocitario e histiocítico en todos los músculos dorsales anchos anteriores afectados. La etiología de la lesión es desconocida, y no se encuentran informes detallados en la literatura. La frecuencia mayor de disminución de la calidad de las canales se observa en los machos más pesados y de mayor edad de las estirpes de engorde de alto rendimiento (P < 0.01). Este estudio es el primero en describir la patología y algunos aspectos epidemiológicos de esta nueva miopatía.

Primary bone tumors are only occasionally reported in avian species. This paper presents the cases of an osteosarcoma in a 6-yr-old free-range chicken and a chondrosarcoma in a 3-yr-old barred Plymouth Rock chicken. The well-differentiated, moderately productive osteoblastic osteosarcoma arose from the synsacral vertebrae and had metastasized to the liver. The chondrosarcoma was well differentiated and firmly attached to the left side of the keel. There was no evidence of metastasis.

Reporte de Caso—Los tumores óseos primarios en las aves: Una revisión y descripción de dos nuevos casos.

Los tumores óseos primarios solamente son reportados ocasionalmente en las especies aviares. Este trabajo presenta los casos de un osteosarcoma en un pollo mantenido en semilibertad de seis años de edad, y un condrosarcoma en un pollo Plymouth Rock barrado de tres años de edad. El osteosarcoma osteoblastito bien diferenciado y moderadamente productivo surgió de las vértebras sinsacrales y se había extendido al hígado. El condrosarcoma estaba bien diferenciado y firmemente unido al lado izquierdo de la quilla. No hubo evidencia de metástasis.

A farm of meat turkeys was affected by a condition, clinically characterized by unilateral inflammation of the orbital region and progressive crossing of the beak, observed in three successive flocks in 2010. While no toxic, genetic, technical, or diet causes could be found, pathologic and bacteriologic analyses were conducted to investigate the case. Pathologic analyses of the heads of affected birds showed blepharitis and exudative sinusitis as well as severe chronic osteomyelitis of all skull bones and mandibula. Staphylococcus aureus was consistently isolated from these lesions. It is supposed that the severe bacterial osteomyelitis induced deviation of some bones, thereby leading to deviation of the beak. Further investigations remain to be carried out to explain these successive outbreaks of staphylococcal osteomyelitis in skull bones.

Reporte de Caso—Un caso de celulitis periorbitaria unilateral y osteomielitis mandibular en una parvada de pavos.

Una granja de pavos productores de carne se vio afectado por una condición, caracterizada clínicamente por la inflamación unilateral de la región orbital y por la desviación con cruzamiento progresivo del pico observado en tres parvadas sucesivas en el año 2010. A pesar de que no se pudo determinar alguna causa tóxica, genética, técnica, o debido a la dieta, se llevaron a cabo análisis patológicos y bacteriológicos para investigar el caso. Los análisis patológicos de las cabezas de las aves afectadas mostraron una blefaritis y sinusitis exudativas, así como una osteomielitis crónica severa de todos los huesos del cráneo y de la mandíbula. Se aisló de manera constante Staphylococcus aureus de estas lesiones. Se supone que la osteomielitis bacteriana grave indujo la desviación de algunos huesos, de tal modo que provocó una desviación del pico. Se requiere llevar a cabo mayor investigación para explicar estos brotes sucesivos de osteomielitis estafilocócica de los huesos del cráneo.

Pigeon circovirus (PiCV) was detected by real-time PCR in cloacal swabs, pharyngeal swabs, and serum samples taken from 74 feral pigeons (Columba livia var. domestica) that were caught at various locations in the city of Ljubljana, Slovenia. PiCV infections were detected in the majority of the tested birds. The highest (74.3%) detection rate was observed in the cloacal swabs and the lowest (31.1%) in serum samples. PiCV DNA was more readily detected in the cloacal swabs, pharyngeal swabs, and serum samples of birds younger than 1 yr. Molecular analysis of partial open reading frame V1 sequences showed that PiCV strains detected in feral pigeons share high nucleotide and amino acid sequence identities with PiCV strains detected in ornamental, racing, meat, and feral pigeons.

Reporte de Caso—Prevalencia de las infecciones asociadas con circovirus de las paloma en las palomas en libertad en Ljubljana, Eslovenia.

El circovirus de las palomas (PiCV) fue detectado por PCR en tiempo real en hisopos cloacales, hisopos faríngeos y en muestras de suero tomadas de 74 palomas en libertad (Columba livia var. domestica) que fueron capturadas en distintos lugares de la ciudad de Ljubljana, Eslovenia. Se detectó la infección por el circovirus de las palomas en la mayoría de las aves analizadas. El porcentaje de detección más alto (74.3%) se observó en los hisopos cloacales y la más baja (31.1%) en muestras de suero. El ADN del circovirus de las palomas fue detectado más fácilmente en los hisopos cloacales, hisopos faríngeos y en muestras de suero de las aves menores de un año. El análisis molecular de las secuencias parciales del marco de lectura continua V1 mostró que las cepas de circovirus detectadas en las palomas en libertad comparten altas identidades en las secuencias de nucleótidos y de aminoácidos con las cepas de circovirus detectadas en palomas ornamentales, de competencia, productoras de carne y salvajes.

Extraintestinal infections by avian pathogenic strains of Escherichia coli (APEC) are commonly reported in poultry, but there is little information on infections by APEC in other bird species. Here we report on the characterization of extraintestinal E. coli isolated from a domesticated peacock, from the south of Brazil, that died of colisepticemia. Necropsy examination revealed congested liver, hypertrophied kidneys, peritonitis, severe typhlitis suggestive of coligranuloma, pneumonia, and airsacculitis—typical signs of colisepticemia. The isolates from lungs, kidney, heart, intestine, liver, and bone marrow all harbored the same virulence-associated factors (iucD, colV, iss, mat, fimC, ompA, traT crl, csgA vgrG, and hcp), yielded the same band pattern in amplified ribosomal DNA restriction analysis, and were allocated to the Escherichia coli Reference Collection group B1. The isolates were resistant to bacitracin, trimethoprim, and tetracycline, but displayed slight differences in their resistance to other antimicrobials. The isolates also differed in their virulence in 1-day-old chickens, but none displayed high virulence in vivo. We conclude that the peacock died of colisepticemia after it was infected with an extraintestinal E. coli strain of low virulence that nevertheless harbored virulence factors generally associated with APEC. This study represents the first characterization of an APEC isolated from a nonpoultry bird species.

Reporte de Caso—Caracterización de Escherichia coli extra-intestinal aisladas de un pavo real (Pavo cristatus) con colisepticemia.

Las infecciones extraintestinales por cepas patógenas de Escherichia coli aviar (APEC) son frecuentes en la avicultura comercial, sin embargo hay poca información sobre las infecciones por E. coli patógena para las aves en otras especies de aves. En este trabajo, se realizó la caracterización de E. coli extraintestinales aisladas de pavo real domesticado en el sur de Brasil cuya causa de muerte fue colisepticemia. Durante la necropsia del pavo se observó el hígado congestionado, los riñones hipertrofiados, peritonitis, tiflitis severa, lo que sugiere coligranuloma, también se observó neumonía y aerosaculitis, que son lesiones típicas de colisepticemia. Todos los aislamientos de los pulmones, riñones, corazón, intestino, hígado y médula ósea mostraron los mismos factores asociados a la virulencia (iucD, colV, iss, mat, fimC, ompA, traT, crl, csgA, vgrG y hcp), que produjeron el mismo patrón de bandas encontrado mediante el análisis de restricción del ADN ribosomal amplificado, y fueron clasificados dentro del grupo B1 de la Colección de Referencia de Escherichia coli. Los aislamientos fueron resistentes a la bacitracina, a la trimetoprima y a la tetraciclina, pero mostraron ligeras diferencias en su resis

We report the first documented occurrence of an outbreak of trichomonosis in a free-ranging small flock of Eurasian collared doves (Streptopelia decaocto) and African collared dove hybrids (Streptopelia risoria) in the Caribbean. In total, 18 birds were examined, including six African collared dove × Eurasian collared dove hybrids and 12 Eurasian collared doves. The affected age class consisted of adults. Sex distribution was equal. With a flock population size of 200 birds, mortality rate for the outbreak was estimated at 15–20%. Living birds were weak, showing evidence of mucus-stained beaks and open-mouth breathing. Caseous ulcerative yellow lesions were restricted to the upper gastrointestinal tract, with the exception of one bird, which had lesions in the upper gastrointestinal tract and in the liver. Ninety-four percent (17/18) of the affected birds had multiple extensive lesions. Lesions located on the roof of the oral cavity extended in 33% (6/18) into the orbit and in 11% (2/18) into the braincase. Using wet-mount microscopy, we were able to confirm Trichomonas gallinae in 22% (4/18) of the sampled animals. Fifteen samples submitted for PCR analysis tested positive. Sequence analysis of the internal transcribed spacer 1 (ITS-1) region of the ribosomal RNA (rRNA) revealed two distinct genotypes of Trichomonas. One sequence had 100% identity to the prototype T. gallinae isolate, whereas the other sequences had 98–100% identity to recently described Trichomonas-like parabasalid. On the basis of gross and histologic findings, along with the sequence results from the columbids in this report, it is likely that this Trichomonas-like parabasalid is pathogenic.

Reporte de Caso—Tricomonosis en palomas turcas (Streptopelia decaocto) en libertad y en palomas de collar (Streptopelia risoria) en el Caribe y descripción de los genotipos de la región ITS-1.

En este reporte se presenta el primer reporte documentado de un brote de Tricomonosis en una pequeña parvada de tórtolas turcas (Streptopelia decaocto) y de tórtolas de collar (Streptopelia risoria) en el Caribe. En total se examinaron 18 aves, seis palomas hibridas paloma de collar × palomas turcas y doce palomas turcas. El grupo de edad afectado fue el de los adultos. La distribución por sexo fue similar. Con un tamaño de la población de parvada de 200 aves, se estimó la tasa de mortalidad de la epidemia en un 15-20%. Las aves vivas estaban débiles, mostrando evidencia de pico manchado de moco y con los picos abiertos por la dificultad para respirar. Se observaron lesiones ulcerosas caseosas de color amarillo que estaban restringidas al tracto gastrointestinal superior, con excepción de un ave, que tenía lesiones en el tracto gastrointestinal superior y en el hígado. El 94% (17/18) de las aves afectadas tenían lesiones extensas múltiples. Las lesiones localizadas en el techo de la cavidad oral se extendieron en un 33% (6/18) dentro de la órbita y en el 11% (2/18) dentro de la caja craneana. Usando la microscopía con montura húmeda, se pudo confirmar la presencia de Trichomonas gallinae en el 22% (4/18) de los animales muestreados. Quince muestras sometidas a PCR resultaron positivas. El análisis de secuencias de la región espaciadora transcrita interna 1 (ITS-1) del ARN ribosomal (ARNr) reveló dos genotipos distintos de Trichomonas. Una secuencia mostró un 100% de identidad con el aislamiento prototipo de